| 摘要 | 第6-8页 |
| ABSTRACT | 第8-10页 |
| 缩略词(Abbreviation) | 第11-13页 |
| 第一章 绪论 | 第13-27页 |
| 1.1 里氏木霉及其所产纤维素酶 | 第13-15页 |
| 1.2 里氏木霉作为表达宿主 | 第15-20页 |
| 1.2.1 异源蛋白表达的里氏木霉菌株 | 第15-17页 |
| 1.2.2 里氏木霉中异源蛋白表达策略 | 第17-20页 |
| 1.3 里氏木霉纤维素酶产量提升策略 | 第20-26页 |
| 1.3.1 转录水平改造 | 第20-22页 |
| 1.3.2 异源/同源基因表达和基因敲除 | 第22-23页 |
| 1.3.3 蛋白质水平改造 | 第23-25页 |
| 1.3.4 启动子改造 | 第25-26页 |
| 1.4 论文立题依据及研究内容 | 第26-27页 |
| 第二章 主要纤维素酶缺失及转录因子Xyr1过表达菌株构建及性状分析 | 第27-48页 |
| 2.1 材料和试剂 | 第27-32页 |
| 2.1.1 菌株和质粒 | 第27-28页 |
| 2.1.2 引物及序列 | 第28-30页 |
| 2.1.3 主要试剂及仪器 | 第30-31页 |
| 2.1.4 培养基 | 第31-32页 |
| 2.2 实验方法 | 第32-36页 |
| 2.2.1 菌种及质粒保存方法 | 第32页 |
| 2.2.2 大肠杆菌质粒提取,DNA片段凝胶回收，酶切产物纯化,丝状真菌基因组提取 | 第32页 |
| 2.2.3 里氏木霉原生质体转化及转化子验证 | 第32-33页 |
| 2.2.4 菌株培养方法 | 第33-34页 |
| 2.2.5 SDS-PAGE电泳 | 第34页 |
| 2.2.6 Gateway敲除系统 | 第34-35页 |
| 2.2.7 生物信息学分析方法 | 第35-36页 |
| 2.3 结果与讨论 | 第36-46页 |
| 2.3.1 cel5a、cel7b、cel6a敲除载体构建 | 第36页 |
| 2.3.2 主要纤维素酶基因缺失菌株构建及验证 | 第36-37页 |
| 2.3.3 主要纤维素酶基因缺失菌株不同碳源平板生长检测 | 第37-41页 |
| 2.3.4 主要纤维素酶基因缺失菌株发酵液上清SDS-PAGE检测 | 第41-42页 |
| 2.3.5 △5a7b6aOExyr1菌株构建 | 第42-44页 |
| 2.3.6 △5a6a7b7a和△5a6a7b7OExyr1菌株的构建 | 第44-46页 |
| 2.4 小结与讨论 | 第46-48页 |
| 第三章 中性内切纤维素酶HiNce5的表达 | 第48-58页 |
| 3.1 材料和试剂 | 第48-50页 |
| 3.1.1 菌株和质粒 | 第48-49页 |
| 3.1.2 引物及序列 | 第49-50页 |
| 3.1.3 主要培养基 | 第50页 |
| 3.2 实验方法 | 第50-51页 |
| 3.2.1 酶活测定 | 第50页 |
| 3.2.2 里氏木霉转化及培养方法 | 第50页 |
| 3.2.3 CMC酶活测定酶谱电泳法 | 第50-51页 |
| 3.3 结果与分析 | 第51-57页 |
| 3.3.1 Hince5定点整合质粒构建 | 第51-52页 |
| 3.3.2 △5a7b6aOExyr1-nce5转化子验证 | 第52-53页 |
| 3.3.3 HiNce5活性检测 | 第53-54页 |
| 3.3.4 HiNce5的表达对里氏木霉总内切酶最适pH的影响 | 第54-55页 |
| 3.3.5 HiNce5在纤维素酶高产菌株C10中的表达 | 第55-57页 |
| 3.4 本章小结 | 第57-58页 |
| 第四章 C10菌株遗传改造及纤维素酶产量分析 | 第58-70页 |
| 4.1 材料和试剂 | 第58-60页 |
| 4.1.1 菌株和质粒 | 第58-59页 |
| 4.1.2 引物及序列 | 第59页 |
| 4.1.3 主要培养基 | 第59-60页 |
| 4.2 实验方法 | 第60-61页 |
| 4.2.1 真菌转化及培养方法 | 第60页 |
| 4.2.2 western-blot方法 | 第60-61页 |
| 4.3 结果及分析 | 第61-69页 |
| 4.3.1 C10-OE xyr1菌株构建及纤维素酶产量分析 | 第61-64页 |
| 4.3.2 C10-bgl1菌株构建及纤维素酶产量分析 | 第64-66页 |
| 4.3.3 OExyr1△tul1菌株构建及纤维素酶产量分析 | 第66-69页 |
| 4.4 本章小结 | 第69-70页 |
| 全文总结与展望 | 第70-72页 |
| 参考文献 | 第72-80页 |
| 攻读硕士学位期间发表的学术论文 | 第80-81页 |
| 致谢 | 第81-82页 |
| 学位论文评阅及答辩情况表 | 第82页 |
