| 摘要 | 第9-12页 |
| ABSTARCT | 第12-14页 |
| 符号与缩略语词汇表 | 第15-17页 |
| 前言 | 第17-19页 |
| 第一章 文献综述 | 第19-45页 |
| 1 马铃薯的概述 | 第19-20页 |
| 2 淀粉的结构与理化性质 | 第20-23页 |
| 2.1 淀粉的结构 | 第20-22页 |
| 2.2 淀粉的理化性质 | 第22-23页 |
| 3 淀粉的合成 | 第23-29页 |
| 3.1 贮藏淀粉的生物合成途径 | 第24-26页 |
| 3.2 支链淀粉的合成模型 | 第26-27页 |
| 3.3 参与淀粉合成的主要酶 | 第27-29页 |
| 4 马铃薯淀粉的遗传改良 | 第29-34页 |
| 4.1 提高马铃薯淀粉的含量 | 第29-31页 |
| 4.2 马铃薯淀粉品质的遗传改良 | 第31-34页 |
| 5 淀粉结合结构域的研究 | 第34-45页 |
| 5.1 碳水化合物结合结构域(CBM) | 第34页 |
| 5.2 淀粉结合结构域(SBD)的分类 | 第34-39页 |
| 5.3 SBD的结构 | 第39-40页 |
| 5.4 SBD的结合位点 | 第40-41页 |
| 5.5 SBD的功能与特性 | 第41-42页 |
| 5.6 SBD的应用 | 第42-43页 |
| 5.7 SBD-平台技术 | 第43-45页 |
| 研究部分 | 第45-121页 |
| 第二章 串联重复的GASBDS蛋白与淀粉结合亲和力 | 第45-71页 |
| 1 材料与方法 | 第45-53页 |
| 1.1 实验材料 | 第45-46页 |
| 1.1.1 菌株与质粒 | 第45-46页 |
| 1.1.2 酶与试剂 | 第46页 |
| 1.1.3 培养基 | 第46页 |
| 1.2 实验方法 | 第46-53页 |
| 1.2.1 黑曲霉GASBD基因的克隆 | 第46-47页 |
| 1.2.2 大肠杆菌表达质粒的构建 | 第47-49页 |
| 1.2.3 GASBD2蛋白可溶性表达条件的优化 | 第49-51页 |
| 1.2.4 可溶性重组蛋白GASBD(s)的诱导表达与分析 | 第51页 |
| 1.2.5 重组蛋白GASBD(s)的纯化与分析 | 第51页 |
| 1.2.6 GASBD(s)重组蛋白与玉米淀粉结合的定性分析 | 第51-52页 |
| 1.2.7 GASBD(s)重组蛋白的结合曲线 | 第52页 |
| 1.2.8 GASBD(s)重组蛋白的吸附等温曲线 | 第52-53页 |
| 2 结果与分析 | 第53-69页 |
| 2.1 黑曲霉GASBD基因的克隆 | 第53页 |
| 2.2 GASBD基因的同源性分析 | 第53-55页 |
| 2.3 大肠杆菌表达质粒的构建 | 第55-60页 |
| 2.4 重组蛋白GASBD2可溶性表达条件的确定 | 第60-63页 |
| 2.5 重组蛋白GASBD(s)的诱导表达与分析 | 第63-64页 |
| 2.6 重组蛋白GASBD(s)的纯化与分析 | 第64-65页 |
| 2.7 GASBD(s)重组蛋白与淀粉结合的定性分析 | 第65-66页 |
| 2.8 GASBD(s)重组蛋白的结合曲线 | 第66-67页 |
| 2.9 GASBD(s)重组蛋白的吸附等温曲线 | 第67-69页 |
| 3 讨论 | 第69-71页 |
| 第三章 GASBD和GASBD2基因在马铃薯中的表达 | 第71-89页 |
| 1 材料与方法 | 第71-78页 |
| 1.1 材料 | 第71-72页 |
| 1.1.1 质粒与菌株 | 第71页 |
| 1.1.2 酶与试剂 | 第71-72页 |
| 1.1.3 植物材料 | 第72页 |
| 1.1.4 培养基 | 第72页 |
| 1.2 方法 | 第72-78页 |
| 1.2.1 植物表达载体pBIN19/GASBD和pBIN19/GASBD2的构建 | 第72-73页 |
| 1.2.2 农杆菌的转化及鉴定 | 第73页 |
| 1.2.3 马铃薯的遗传转化 | 第73-74页 |
| 1.2.4 转化植株的PCR检测 | 第74-75页 |
| 1.2.5 马铃薯淀粉的提取 | 第75页 |
| 1.2.6 Anti-GASBD多克隆抗体的制备 | 第75页 |
| 1.2.7 Western斑点杂交分析 | 第75-76页 |
| 1.2.8 淀粉颗粒形貌的观察 | 第76页 |
| 1.2.9 转基因马铃薯块茎中淀粉含量的分析 | 第76页 |
| 1.2.10 表观直链淀粉含量的测定 | 第76-77页 |
| 1.2.11 淀粉糊化性质的测定 | 第77页 |
| 1.2.12 淀粉热力学性质的测定 | 第77-78页 |
| 2 结果与分析 | 第78-88页 |
| 2.1 植物表达载体的构建及农杆菌的转化 | 第78-79页 |
| 2.2 马铃薯的遗传转化 | 第79-80页 |
| 2.3 转基因马铃薯植株的分析 | 第80-84页 |
| 2.3.1 PCR分析 | 第80-81页 |
| 2.3.2 Western斑点杂交分析 | 第81-84页 |
| 2.4 转基因马铃薯淀粉颗粒形貌的观察 | 第84-85页 |
| 2.5 转基因马铃薯块茎中淀粉含量的分析 | 第85-86页 |
| 2.6 转基因马铃薯淀粉中表观直链淀粉含量的分析 | 第86页 |
| 2.7 转基因马铃薯淀粉糊化特性的分析 | 第86-87页 |
| 2.8 转基因马铃薯淀粉热力学性质的分析 | 第87-88页 |
| 3 讨论 | 第88-89页 |
| 第四章 GLGB/GASBD融合基因的表达对马铃薯淀粉的结构和特性的影响 | 第89-121页 |
| 1 材料与方法 | 第89-97页 |
| 1.1 材料 | 第89-90页 |
| 1.1.1 质粒与菌株 | 第89-90页 |
| 1.1.2 酶与试剂 | 第90页 |
| 1.1.3 植物材料 | 第90页 |
| 1.1.4 培养基 | 第90页 |
| 1.2 方法 | 第90-97页 |
| 1.2.1 大肠杆菌glgB基因的克隆 | 第90-91页 |
| 1.2.2 植物表达载体的构建 | 第91-93页 |
| 1.2.3 农杆菌的转化及鉴定 | 第93页 |
| 1.2.4 马铃薯的遗传转化 | 第93页 |
| 1.2.5 转化植株的PCR检测 | 第93-94页 |
| 1.2.6 转基因马铃薯的半定量RT-PCR分析 | 第94页 |
| 1.2.7 马铃薯淀粉的提取 | 第94页 |
| 1.2.8 Western斑点杂交分析 | 第94页 |
| 1.2.9 转基因马铃薯淀粉葡萄糖当量值(DE值)的测定 | 第94-95页 |
| 1.2.10 转基因马铃薯淀粉颗粒形貌的观察 | 第95页 |
| 1.2.11 转基因马铃薯块茎中淀粉含量的分析 | 第95页 |
| 1.2.12 表观直链淀粉含量的测定 | 第95页 |
| 1.2.13 直链、支链淀粉的分离 | 第95页 |
| 1.2.14 直链淀粉和支链淀粉最大吸收波长(λ_(max))的测定 | 第95页 |
| 1.2.15 支链淀粉链长分布的分析 | 第95-96页 |
| 1.2.16 淀粉糊化性质的测定 | 第96页 |
| 1.2.17 淀粉热力学性质的测定 | 第96页 |
| 1.2.18 淀粉糊性质的测定 | 第96页 |
| 1.2.19 相关性分析 | 第96-97页 |
| 2 结果与分析 | 第97-118页 |
| 2.1 大肠杆菌glgB基因的克隆及分析 | 第97-98页 |
| 2.2 植物表达载体的构建及农杆菌的转化 | 第98-100页 |
| 2.3 马铃薯的遗传转化 | 第100页 |
| 2.4 转化马铃薯植株的分析 | 第100-105页 |
| 2.4.1 PCR分析 | 第100-102页 |
| 2.4.2 半定量RT-PCR分析 | 第102-104页 |
| 2.4.3 Western斑点杂交分析 | 第104-105页 |
| 2.5 转基因对淀粉分支程度的影响 | 第105-108页 |
| 2.6 转基因马铃薯淀粉颗粒形貌的观察 | 第108-109页 |
| 2.7 转基因马铃薯块茎中淀粉含量的分析 | 第109-110页 |
| 2.8 转基因马铃薯淀粉组成及结构的分析 | 第110-114页 |
| 2.8.1 直链、支链淀粉的最大吸收波长 | 第110-111页 |
| 2.8.2 表观直链淀粉含量的分析 | 第111-112页 |
| 2.8.3 支链淀粉的链长分布 | 第112-114页 |
| 2.9 淀粉分支程度的增加对淀粉糊化特性的影响 | 第114页 |
| 2.10 淀粉分支程度的增加对淀粉热力学性质的影响 | 第114-115页 |
| 2.11 淀粉分支程度的增加对淀粉糊性质的影响 | 第115-118页 |
| 2.11.1 淀粉分支程度的增加对淀粉糊透明度的影响 | 第115-116页 |
| 2.11.2 淀粉分支程度的增加对淀粉糊凝沉性的影响 | 第116-117页 |
| 2.11.3 淀粉分支程度的增加对淀粉糊冻融稳定性的影响 | 第117-118页 |
| 3 讨论 | 第118-121页 |
| 全文结论 | 第121-123页 |
| 主要创新点与后续研究展望 | 第123-125页 |
| 参考文献 | 第125-139页 |
| 攻读博士学位期间已发表和待发表的论文 | 第139-141页 |
| 致谢 | 第141页 |
