| 摘要 | 第5-7页 |
| Abstract | 第7-8页 |
| 英文缩略词 | 第11-13页 |
| 第一部分 绪论 | 第13-24页 |
| 1.1 前言 | 第13-14页 |
| 1.2 NRF2-Keap1-ARE信号通路介绍 | 第14-17页 |
| 1.2.1 NRF2的基本结构与功能 | 第14页 |
| 1.2.2 Keap1基本结构与功能 | 第14-15页 |
| 1.2.3 NRF2-Keap1-ARE信号通路激活机制 | 第15-17页 |
| 1.3 NRF2的作用 | 第17-22页 |
| 1.3.1 NRF2下游的基因 | 第17-19页 |
| 1.3.2 NRF2在肿瘤中的双面作用 | 第19-20页 |
| 1.3.3 NRF2与细胞代谢 | 第20-22页 |
| 1.3.4 NRF2与细胞凋亡和自噬相关的研究 | 第22页 |
| 1.4 氧化应激与ROS | 第22-24页 |
| 第二部分 实验材料与实验方法 | 第24-35页 |
| 2.1 溶液配制 | 第24-25页 |
| 2.2 实验方法 | 第25-35页 |
| 2.2.1 细胞培养 | 第25页 |
| 2.2.2 小鼠胚胎成纤维细胞(MEF)分离与冻存 | 第25-26页 |
| 2.2.3 质粒DNA的小量提取 | 第26-27页 |
| 2.2.4 细胞转染 | 第27页 |
| 2.2.5 在HEK-293T中包装慢病毒 | 第27-29页 |
| 2.2.6 慢病毒感染 | 第29页 |
| 2.2.7 细胞总蛋白质的提取 | 第29页 |
| 2.2.8 蛋白样品浓度测定 | 第29-30页 |
| 2.2.9 细胞内活性氧(ROS)检测 | 第30页 |
| 2.2.10 线粒体内活性氧(ROS)检测 | 第30-31页 |
| 2.2.11 线粒体膜电位检测 | 第31页 |
| 2.2.12 免疫荧光 | 第31-32页 |
| 2.2.13 免疫印迹Western Blot | 第32页 |
| 2.2.14 细胞总RNA的提取 | 第32-33页 |
| 2.2.15 特异性反转录 | 第33-34页 |
| 2.2.16 RT-PCR | 第34-35页 |
| 第三部分 实验结果与讨论 | 第35-52页 |
| 3.1 利用慢病毒过表达系统筛选影响MEF细胞命运的基因 | 第35-37页 |
| 3.2 NRF2过表达对MEF细胞的作用 | 第37-42页 |
| 3.2.1 MEF细胞体外培养中NRF2表达的情况 | 第37-38页 |
| 3.2.2 构建稳定高表达的NRF2突变体 | 第38-39页 |
| 3.2.3 过表达NRF2突变体影响MEF细胞生长 | 第39-41页 |
| 3.2.4 MEF细胞中敲降Keap1影响细胞的生长 | 第41-42页 |
| 3.3 MEF传代早期过表达NRF2突变体会影响细胞增殖和衰老 | 第42-44页 |
| 3.4 NRF2突变体过表达促进永生化MEF细胞的生长 | 第44-46页 |
| 3.5 MEF传代早期过表达NRF2突变体降低细胞ROS和线粒体膜电位水平 | 第46-48页 |
| 3.6 FOXO3拮抗NRF2过表达对MEF细胞的作用 | 第48-50页 |
| 3.7 总结讨论 | 第50-52页 |
| 参考文献 | 第52-60页 |
| 致谢 | 第60-61页 |
