| 中文摘要 | 第1-6页 |
| ABSTRACT | 第6-14页 |
| 前言 | 第14-17页 |
| 1 立题依据 | 第14-15页 |
| 2 研究内容 | 第15-16页 |
| 3 技术路线图 | 第16-17页 |
| 第一章 双向电泳方法验证冬虫夏草指标性蛋白质组分 | 第17-30页 |
| 1 仪器与材料 | 第17-21页 |
| ·仪器 | 第17页 |
| ·试剂 | 第17-18页 |
| ·主要试剂配制 | 第18-19页 |
| ·药材 | 第19-21页 |
| 2 方法 | 第21-24页 |
| ·蛋白质提取 | 第21页 |
| ·第一次提取 | 第21页 |
| ·第二次提取 | 第21页 |
| ·蛋白质保存 | 第21页 |
| ·绘制破碎时间与蛋白质含量关系图 | 第21-22页 |
| ·标准曲线制备 | 第21-22页 |
| ·样品含量测定 | 第22页 |
| ·凝胶扫描法定量蛋白质 | 第22-23页 |
| ·SDS-PAGE检测分析 | 第22页 |
| ·凝胶成像光密度扫描和定量 | 第22页 |
| ·方法的准确度和精密度验证 | 第22-23页 |
| ·蛋白质纯化 | 第23页 |
| ·TCA-丙酮沉淀蛋白 | 第23页 |
| ·试剂盒纯化蛋白 | 第23页 |
| ·双向凝胶电泳 | 第23页 |
| ·染色 | 第23页 |
| ·凝胶扫描及图像分析 | 第23-24页 |
| 3 结果 | 第24-28页 |
| ·蛋白质提取评价 | 第24-25页 |
| ·凝胶扫描法定量蛋白质 | 第25-27页 |
| ·牛血清蛋白标准溶液与样品上样量 | 第25页 |
| ·不同牛血清蛋白标准溶液上样量与光密度值之间的线性关系 | 第25-26页 |
| ·牛血清标准溶液与样品图谱 | 第26-27页 |
| ·方法准确度和精密度验证 | 第27页 |
| ·指标性蛋白斑点软件分析 | 第27-28页 |
| ·双向电泳方法优化 | 第27页 |
| ·冬虫夏草及伪品指标性蛋白斑点验证 | 第27-28页 |
| 4 小结与讨论 | 第28-30页 |
| ·前期冬虫夏草与混伪品指标性蛋白斑点验证 | 第28-29页 |
| ·凝胶扫描方法分析 | 第29页 |
| ·蛋白质提取方法 | 第29页 |
| ·蛋白质保存 | 第29-30页 |
| 第二章 冬虫夏草指标性蛋白质的鉴定分析 | 第30-40页 |
| 1 仪器与材料 | 第30-31页 |
| ·仪器 | 第30-31页 |
| ·样品 | 第31页 |
| ·试剂 | 第31页 |
| ·主要溶液配制 | 第31页 |
| 2 实验方法 | 第31-32页 |
| ·蛋白胶内酶解 | 第31-32页 |
| ·胶内蛋白斑点回收 | 第31页 |
| ·胶内蛋白质谱前处理 | 第31-32页 |
| ·质谱分析 | 第32页 |
| 3 结果 | 第32-36页 |
| 4 小结 | 第36-40页 |
| ·指标性蛋白数据库分析 | 第36-37页 |
| ·指标性蛋白的生物功能分析 | 第37-40页 |
| 第三章 冬虫夏草指标性蛋白质IP4的制备与鉴定 | 第40-54页 |
| 1 仪器与材料 | 第41-42页 |
| ·仪器 | 第41页 |
| ·药材 | 第41页 |
| ·试剂 | 第41页 |
| ·主要试剂配制 | 第41-42页 |
| 2 方法 | 第42-46页 |
| ·PAGE与HPLC法寻找指标性蛋白质 | 第42-45页 |
| ·蛋白质粗提取 | 第42页 |
| ·SDS-PAGE寻找指标性蛋白 | 第42-43页 |
| ·非变性PAGE法寻找指标性蛋白 | 第43-44页 |
| ·HPLC寻找指标性蛋白 | 第44-45页 |
| ·制备指标性蛋白IP4 | 第45页 |
| ·指标性蛋白质粗提取 | 第45页 |
| ·PAGE胶中指标性蛋白质回收方法考察 | 第45页 |
| ·指标性蛋白质IP4纯度鉴定 | 第45-46页 |
| ·HPLC检测IP4纯度 | 第45-46页 |
| ·SDS-PAGE检测IP4纯度 | 第46页 |
| ·PAGE检测IP4纯度 | 第46页 |
| ·IEF检测IP4纯度 | 第46页 |
| ·MALDI-TOF-MS鉴定抗原 | 第46页 |
| 3 结果 | 第46-52页 |
| ·指标性蛋白的寻找与鉴定 | 第46-51页 |
| ·SDS-PAGE寻找指标性蛋白 | 第46-47页 |
| ·非变性PAGE寻找指标性蛋白 | 第47-49页 |
| ·HPLC寻找指标性蛋白峰 | 第49-51页 |
| ·IP4纯度检测 | 第51-52页 |
| ·HPLC检测IP4纯度 | 第51页 |
| ·非变性梯度PAGE检测IP4纯度 | 第51-52页 |
| ·IEF检测P1纯度 | 第52页 |
| ·质谱分析 | 第52页 |
| 4 小结与讨论 | 第52-54页 |
| ·SDS-PAGE分析 | 第52页 |
| ·HPLC分析 | 第52-53页 |
| ·PAGE分析 | 第53页 |
| ·蛋白回收方法考察 | 第53-54页 |
| 第四章 IP4多克隆抗体的制备与ELISA定量分析方法建立 | 第54-67页 |
| 1 仪器与材料 | 第54-56页 |
| ·仪器 | 第54-55页 |
| ·实验动物 | 第55页 |
| ·药材 | 第55页 |
| ·试剂 | 第55页 |
| ·主要试剂配制 | 第55-56页 |
| 2 方法 | 第56-61页 |
| ·制备多克隆抗体 | 第56-57页 |
| ·抗原制备 | 第56页 |
| ·免疫动物 | 第56-57页 |
| ·采集血清并保存 | 第57页 |
| ·多克隆抗体特异性与效价测定 | 第57-58页 |
| ·免疫双扩散检测多克隆抗体特异性 | 第57页 |
| ·染色与保存 | 第57-58页 |
| ·多克隆抗体效价测定 | 第58页 |
| ·ELISA检测方法的建立 | 第58-61页 |
| ·ELISA检测方法最适条件建立 | 第58-60页 |
| ·ELISA检测方法操作流程 | 第60-61页 |
| ·ELISA检测法特异性检测 | 第61页 |
| 3 结果 | 第61-66页 |
| ·免疫双扩散测定多克隆抗体 | 第61页 |
| ·间接ELISA法测定多克隆抗体效价 | 第61-62页 |
| ·ELISA检测方法条件选择 | 第62-65页 |
| ·酶标板均一性测定 | 第62页 |
| ·包被液的选择 | 第62页 |
| ·抗原包被浓度的选择 | 第62-63页 |
| ·抗原包被时间的选择 | 第63页 |
| ·封闭液的选择 | 第63页 |
| ·封闭时间的选择 | 第63-64页 |
| ·酶标抗体最佳稀释度的优化 | 第64页 |
| ·酶标抗体作用时间的优化 | 第64页 |
| ·TMB底物作用时间的优化选择 | 第64-65页 |
| ·ELISA定量定性特异性检测冬虫夏草 | 第65-66页 |
| 4 小结与讨论 | 第66-67页 |
| ·多克隆抗体制备注意事项 | 第66页 |
| ·ELISA方法中关键因素分析 | 第66-67页 |
| ·酶标抗体使用量 | 第66页 |
| ·TMB显色时间 | 第66页 |
| ·ELISA定量评价冬虫夏草 | 第66-67页 |
| 结论 | 第67-69页 |
| 参考文献 | 第69-76页 |
| [文献综述] 中国冬虫夏草寄主昆虫种类研究 | 第76-88页 |
| 1 中国鳞翅目蝙蝠蛾科蝠蛾属的现行分类 | 第76-80页 |
| ·现行分类依据 | 第76-77页 |
| ·现行分类的变化 | 第77-80页 |
| 2. 中药冬虫夏草基源动物种类 | 第80-85页 |
| ·研究历史 | 第80-81页 |
| ·冬虫夏草寄主昆虫种类 | 第81-85页 |
| 3 小结 | 第85-86页 |
| 参考文献 | 第86-88页 |
| 致谢 | 第88-89页 |
| 在读期间公开发表的学术论文、专著及科研成果 | 第89-90页 |