致谢 | 第1-5页 |
摘要 | 第5-7页 |
Abstract | 第7-11页 |
第一章 引言 | 第11-23页 |
·姜黄素(Curcumin) | 第12-16页 |
·姜黄素的理化性质 | 第13页 |
·姜黄素的分子靶标 | 第13-14页 |
·姜黄素与癌症 | 第14-15页 |
·姜黄素的生物利用度及安全性 | 第15页 |
·姜黄素的临床应用前景 | 第15-16页 |
·早期生长反应因子 1(Egr-1) | 第16-19页 |
·Egr-1 基因的结构 | 第16-17页 |
·Egr-1 蛋白的功能 | 第17-18页 |
·Egr-1 与肿瘤的关系 | 第18-19页 |
·p53基因家族 | 第19-23页 |
·p53基因 | 第19-21页 |
·p63、p73基因 | 第21-23页 |
第二章 材料与方法 | 第23-31页 |
·主要实验仪器 | 第23页 |
·主要试剂 | 第23-24页 |
·细胞培养、冻存及复苏 | 第24页 |
·WST-1 细胞毒性及增殖分析 | 第24-25页 |
·Hoechst 33258凋亡染色分析 | 第25页 |
·细胞免疫荧光 | 第25页 |
·细胞转染及稳定细胞系的建立 | 第25-26页 |
·Trizol法提取细胞总RNA | 第26页 |
·第一链cDNA合成 | 第26-27页 |
·半定量RT-PCR(Semi-quantitative RT-PCR) | 第27页 |
·琼脂糖凝胶电泳 | 第27-28页 |
·荧光定量PCR(Real-time PCR) | 第28-29页 |
·蛋白质印迹(Western Blot) | 第29页 |
·pEGFP-Egr-1 哺乳动物表达载体构建 | 第29页 |
·pGreenPuro-Egr-1 哺乳动物shRNA慢病毒载体构建 | 第29-30页 |
·大肠杆菌感受态的制备及转化 | 第30-31页 |
第三章 结果与分析 | 第31-44页 |
·体外培养的HepG-2 细胞状态 | 第31页 |
·姜黄素抑制HepG-2 细胞增殖 | 第31-32页 |
·姜黄素诱导HepG-2 细胞凋亡 | 第32-33页 |
·姜黄素对HepG-2 肿瘤相关基因表达的影响 | 第33页 |
·姜黄素对HepG-2 细胞Egr-1 基因mRNA表达的影响 | 第33-34页 |
·姜黄素对HepG-2 细胞Egr-1 蛋白质表达的影响 | 第34-35页 |
·Egr-1 蛋白在HepG-2 细胞中的细胞定位 | 第35-36页 |
·pEGFP-Egr-1 表达载体的构建及鉴定结果 | 第36-37页 |
·pGreenPuro-Egr-1 sh RNA慢病毒载体的构建及鉴定结果 | 第37页 |
·HepG-2/ pGreenPuro-Egr-1 shRNA稳定细胞系的建立 | 第37-38页 |
·姜黄素对Hep G-2/ pGreenPuro-Egr-1 细胞系增殖的影响 | 第38-39页 |
·姜黄素对Hep G-2/ pGreenPuro-Egr-1 细胞系凋亡的影响 | 第39-40页 |
·pEGFP-Egr-1 瞬时转染HepG-2 细胞 | 第40-41页 |
·pEGFP-Egr-1 在HepG-2 细胞内的表达 | 第41-42页 |
·Egr-1 外来过表达对HepG-2 细胞p53和p21表达的影响 | 第42-44页 |
第四章 讨论与展望 | 第44-48页 |
参考文献 | 第48-58页 |
附录(Supplementals) | 第58-64页 |
S1 pMD18质粒图谱 | 第58页 |
S2 pMD18-Egr-1 菌落PCR鉴定电泳结果 | 第58页 |
S3 pEGFP-Egr-1 质粒图谱 | 第58-59页 |
S4 pGreenPuro shRNA质粒图谱 | 第59页 |
S5 pGreenPuro-Egr-1 sh RNA质粒图谱 | 第59页 |
S6 HepG-2/pGreenPuro-Egr-1 稳定细胞系荧光图 | 第59-60页 |
S7 半定量RT-PCR所用的引物序列 | 第60-61页 |
S8 荧光定量PCR所用的引物序列 | 第61页 |
S9 本实验所用的si RNA及shRNA序列 | 第61页 |
S10 本实验所用的荧光定量PCR反应程序 | 第61-62页 |
S11 shRNA双链退火 | 第62页 |
S12 pEGFP-Egr-1 部分测序结果 | 第62-63页 |
S13 pGreenPuro-Egr-1 部分测序结果 | 第63-64页 |