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姜黄素抑制肝癌HepG-2细胞增殖作用及其机制研究

致谢第1-5页
摘要第5-7页
Abstract第7-11页
第一章 引言第11-23页
   ·姜黄素(Curcumin)第12-16页
     ·姜黄素的理化性质第13页
     ·姜黄素的分子靶标第13-14页
     ·姜黄素与癌症第14-15页
     ·姜黄素的生物利用度及安全性第15页
     ·姜黄素的临床应用前景第15-16页
   ·早期生长反应因子 1(Egr-1)第16-19页
     ·Egr-1 基因的结构第16-17页
     ·Egr-1 蛋白的功能第17-18页
     ·Egr-1 与肿瘤的关系第18-19页
   ·p53基因家族第19-23页
     ·p53基因第19-21页
     ·p63、p73基因第21-23页
第二章 材料与方法第23-31页
   ·主要实验仪器第23页
   ·主要试剂第23-24页
   ·细胞培养、冻存及复苏第24页
   ·WST-1 细胞毒性及增殖分析第24-25页
   ·Hoechst 33258凋亡染色分析第25页
   ·细胞免疫荧光第25页
   ·细胞转染及稳定细胞系的建立第25-26页
   ·Trizol法提取细胞总RNA第26页
   ·第一链cDNA合成第26-27页
   ·半定量RT-PCR(Semi-quantitative RT-PCR)第27页
   ·琼脂糖凝胶电泳第27-28页
   ·荧光定量PCR(Real-time PCR)第28-29页
   ·蛋白质印迹(Western Blot)第29页
   ·pEGFP-Egr-1 哺乳动物表达载体构建第29页
   ·pGreenPuro-Egr-1 哺乳动物shRNA慢病毒载体构建第29-30页
   ·大肠杆菌感受态的制备及转化第30-31页
第三章 结果与分析第31-44页
   ·体外培养的HepG-2 细胞状态第31页
   ·姜黄素抑制HepG-2 细胞增殖第31-32页
   ·姜黄素诱导HepG-2 细胞凋亡第32-33页
   ·姜黄素对HepG-2 肿瘤相关基因表达的影响第33页
   ·姜黄素对HepG-2 细胞Egr-1 基因mRNA表达的影响第33-34页
   ·姜黄素对HepG-2 细胞Egr-1 蛋白质表达的影响第34-35页
   ·Egr-1 蛋白在HepG-2 细胞中的细胞定位第35-36页
   ·pEGFP-Egr-1 表达载体的构建及鉴定结果第36-37页
   ·pGreenPuro-Egr-1 sh RNA慢病毒载体的构建及鉴定结果第37页
   ·HepG-2/ pGreenPuro-Egr-1 shRNA稳定细胞系的建立第37-38页
   ·姜黄素对Hep G-2/ pGreenPuro-Egr-1 细胞系增殖的影响第38-39页
   ·姜黄素对Hep G-2/ pGreenPuro-Egr-1 细胞系凋亡的影响第39-40页
   ·pEGFP-Egr-1 瞬时转染HepG-2 细胞第40-41页
   ·pEGFP-Egr-1 在HepG-2 细胞内的表达第41-42页
   ·Egr-1 外来过表达对HepG-2 细胞p53和p21表达的影响第42-44页
第四章 讨论与展望第44-48页
参考文献第48-58页
附录(Supplementals)第58-64页
 S1 pMD18质粒图谱第58页
 S2 pMD18-Egr-1 菌落PCR鉴定电泳结果第58页
 S3 pEGFP-Egr-1 质粒图谱第58-59页
 S4 pGreenPuro shRNA质粒图谱第59页
 S5 pGreenPuro-Egr-1 sh RNA质粒图谱第59页
 S6 HepG-2/pGreenPuro-Egr-1 稳定细胞系荧光图第59-60页
 S7 半定量RT-PCR所用的引物序列第60-61页
 S8 荧光定量PCR所用的引物序列第61页
 S9 本实验所用的si RNA及shRNA序列第61页
 S10 本实验所用的荧光定量PCR反应程序第61-62页
 S11 shRNA双链退火第62页
 S12 pEGFP-Egr-1 部分测序结果第62-63页
 S13 pGreenPuro-Egr-1 部分测序结果第63-64页

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