| 摘要 | 第1-5页 |
| ABSTRACT | 第5-12页 |
| 文献综述 | 第12-19页 |
| ·茶树中咖啡碱的概况 | 第12-13页 |
| ·咖啡碱的功能 | 第13页 |
| ·茶树体内咖啡碱的生物合成 | 第13-17页 |
| ·茶树中咖啡碱的生物合成部位 | 第13-14页 |
| ·茶树中咖啡碱的生物合成途径 | 第14页 |
| ·咖啡碱的嘌呤环和甲基供体 | 第14-16页 |
| ·咖啡碱合成相关酶和基因的研究进展 | 第16-17页 |
| ·低咖啡碱饮品的发展 | 第17-19页 |
| ·脱咖啡碱的方法 | 第17页 |
| ·低咖啡碱饮料作物的培育 | 第17-18页 |
| ·基因工程技术获得低咖啡碱饮料作物 | 第18-19页 |
| 2 引言 | 第19-21页 |
| ·研究目的与意义 | 第19页 |
| ·研究内容 | 第19-20页 |
| ·技术路线 | 第20-21页 |
| 3 材料与方法 | 第21-34页 |
| ·材料 | 第21页 |
| ·仪器与试剂 | 第21-22页 |
| ·主要实验仪器 | 第21页 |
| ·主要试剂 | 第21-22页 |
| ·主要试剂配方 | 第22页 |
| ·方法 | 第22-34页 |
| ·茶树7-NMT基因的克隆 | 第22-27页 |
| ·茶树总RNA的提取和检测 | 第22-23页 |
| ·cDNA第一链的合成 | 第23-24页 |
| ·简并引物设计和PCR扩增 | 第24-25页 |
| ·特异性引物设计和PCR扩增 | 第25页 |
| ·凝胶电泳回收PCR产物 | 第25-26页 |
| ·制备感受态E.COLI DH5α | 第26页 |
| ·PCR产物的连接转化 | 第26-27页 |
| ·阳性克隆的鉴定和测定 | 第27页 |
| ·茶树7-NMT基因的原核表达 | 第27-30页 |
| ·重新设计原核表达引物 | 第27-28页 |
| ·质粒提取 | 第28页 |
| ·质粒的双酶切反应与重组连接 | 第28-29页 |
| ·重组质粒的转化 | 第29页 |
| ·重组蛋白诱导表达及表达条件优化 | 第29-30页 |
| ·体外酶活性检测 | 第30页 |
| ·咖啡碱合成酶多克隆抗体的制备 | 第30-34页 |
| ·TCS1基因的扩增 | 第30-31页 |
| ·原核表达载体的构建 | 第31页 |
| ·重组蛋白诱导表达及表达条件优化 | 第31页 |
| ·TCS1的体外酶活性检测 | 第31-32页 |
| ·目的蛋白的分离纯化 | 第32页 |
| ·抗血清的制备 | 第32页 |
| ·抗血清的纯化 | 第32页 |
| ·多克隆抗体的效价鉴定 | 第32-33页 |
| ·多克隆抗体的Western blot检测 | 第33-34页 |
| 4 结果与分析 | 第34-43页 |
| ·RNA的提取与质量检测 | 第34页 |
| ·茶树7-NMT基因的克隆、重组载体构建及在大肠杆菌中的表达 | 第34-38页 |
| ·RT-PCR扩增 | 第34-35页 |
| ·原核表达引物的PCR扩增及原核表达载体的构建 | 第35-36页 |
| ·NMT基因的原核表达 | 第36页 |
| ·融合蛋白的体外酶活性检测 | 第36-38页 |
| ·咖啡碱合成酶多克隆抗体的制备 | 第38-43页 |
| ·TCS1目的基因的PCR扩增及原核表达载体的构建 | 第38页 |
| ·TCS1重组蛋白在大肠杆菌中的表达及表达条件优化 | 第38-39页 |
| ·融合蛋白的体外酶活性检测 | 第39-41页 |
| ·目的蛋白的纯化 | 第41-42页 |
| ·抗血清的纯化 | 第42页 |
| ·多克隆抗体的效价鉴定 | 第42页 |
| ·多克隆抗体的Western blot检测 | 第42-43页 |
| 5 讨论 | 第43-46页 |
| ·改良的试剂盒法提取总RNA | 第43页 |
| ·茶树7-NMT基因的克隆与表达 | 第43-44页 |
| ·茶树咖啡碱合成酶多克隆抗体的制备 | 第44-46页 |
| 6 结论 | 第46-47页 |
| ·茶树7-NMT基因的克隆 | 第46页 |
| ·茶树7-NMT基因的原核表达 | 第46页 |
| ·茶树TCS1多克隆抗体的制备 | 第46-47页 |
| 参考文献 | 第47-51页 |
| 附录 | 第51-54页 |
| 致谢 | 第54-55页 |
| 作者简介 | 第55页 |
