| 摘要 | 第1-14页 |
| ABSTRACT | 第14-19页 |
| 缩略语中英文对照 | 第19-21页 |
| 引言 | 第21-23页 |
| 第一篇 文献综述 | 第23-57页 |
| 第一章 转基因动物的研究现状 | 第23-47页 |
| 1 制备转基因动物常用技术 | 第23-27页 |
| ·原核显微注射技术 | 第23-24页 |
| ·逆转录病毒载体技术 | 第24页 |
| ·胚胎干细胞技术 | 第24-25页 |
| ·精子载体介导的转基因技术 | 第25页 |
| ·体细胞克隆技术 | 第25页 |
| ·原始生殖细胞介导技术 | 第25-26页 |
| ·诱导性多能干细胞介导技术 | 第26-27页 |
| 2 动物转基因技术的策略 | 第27-34页 |
| ·构建表达载体策略 | 第27-28页 |
| ·定点整合策略 | 第28-34页 |
| ·同源重组技术 | 第28-29页 |
| ·phiC31整合酶介导的定点整合技术 | 第29页 |
| ·RNAi介导的定点敲除技术 | 第29-30页 |
| ·锌指核酸酶介导的定点整合技术 | 第30-31页 |
| ·TALEN介导的定点整合技术 | 第31-32页 |
| ·CRISPR/Cas介导的定点整合技术 | 第32-34页 |
| 3 转基因动物的研究意义 | 第34-37页 |
| ·生产保健蛋白 | 第34页 |
| ·生产药物蛋白 | 第34-35页 |
| ·生产特殊蛋白 | 第35页 |
| ·改良家畜生产性能 | 第35-36页 |
| ·转基因动物的生产成本和效率 | 第36-37页 |
| 4 转基因动物的检测 | 第37-40页 |
| ·外源基因是否存在的检测 | 第37页 |
| ·外源基因拷贝数的检测 | 第37-38页 |
| ·外源基因整合位点的检测 | 第38页 |
| ·反向PCR | 第38页 |
| ·热不对称交互式PCR | 第38页 |
| ·转基因表达的检测 | 第38-40页 |
| 参考文献 | 第40-47页 |
| 第二章 GH在动物研究中的应用 | 第47-57页 |
| 1 GH的结构及定位 | 第47页 |
| 2 GH的调控机制 | 第47-48页 |
| 3 GH的生物学功能 | 第48-51页 |
| ·GH与动物的生长 | 第48页 |
| ·GH与物质代谢 | 第48-49页 |
| ·GH与机体的免疫调节 | 第49页 |
| ·GH与乳腺发育及泌乳 | 第49-51页 |
| 4 GH在动物生产上的应用 | 第51-52页 |
| 参考文献 | 第52-57页 |
| 第二篇 试验研究 | 第57-131页 |
| 第三章 山羊乳腺特异性表达载体pcGH的构建及验证 | 第57-79页 |
| 摘要 | 第57-58页 |
| 1 材料与方法 | 第58-65页 |
| ·材料 | 第58-61页 |
| ·试验材料 | 第58-59页 |
| ·试验仪器 | 第59页 |
| ·试验试剂 | 第59-61页 |
| ·方法 | 第61-65页 |
| ·引物合成 | 第61页 |
| ·山羊gh基因的克隆 | 第61-62页 |
| ·山羊β-LG5’端及β-LG3’端基因的克隆 | 第62页 |
| ·乳腺特异性表达载体pcGH的构建 | 第62-63页 |
| ·山羊乳腺上皮细胞的分离培养 | 第63-64页 |
| ·山羊乳腺上皮细胞的鉴定 | 第64-65页 |
| ·山羊乳腺特异性表达载体pcGH在乳腺上皮细胞中的表达检测 | 第65页 |
| ·数据分析 | 第65页 |
| 2 结果与分析 | 第65-72页 |
| ·山羊gh的克隆 | 第65-66页 |
| ·山羊β-LG5’端和3’端调控序列的克隆 | 第66-67页 |
| ·载体pV-BLG5构建及鉴定 | 第67页 |
| ·载体pV-BLG5-GH构建及鉴定 | 第67-69页 |
| ·载体pcGH的构建及鉴定 | 第69页 |
| ·山羊乳腺上皮细胞原代培养及纯化 | 第69-70页 |
| ·山羊乳腺上皮细胞的免疫组化鉴定 | 第70页 |
| ·山羊乳腺特异性表达载体pcGH在乳腺上皮细胞中的表达检测 | 第70-72页 |
| 3 讨论 | 第72-75页 |
| 参考文献 | 第75-79页 |
| 第四章 转GH基因阳性细胞的筛选及转GH基因奶山羊的制备 | 第79-93页 |
| 摘要 | 第79-80页 |
| 1 材料与方法 | 第80-84页 |
| ·材料 | 第80-82页 |
| ·试验材料 | 第80-81页 |
| ·试验仪器 | 第81页 |
| ·试验试剂 | 第81-82页 |
| ·方法 | 第82-84页 |
| ·山羊胎儿成纤维细胞的分离培养 | 第82页 |
| ·山羊胎儿成纤维细胞的性别鉴定 | 第82页 |
| ·转GH阳性细胞的筛选 | 第82-83页 |
| ·转GH阳性细胞的鉴定 | 第83页 |
| ·体细胞核移植 | 第83-84页 |
| ·重构胚的培养及胚胎移植 | 第84页 |
| 2 结果与分析 | 第84-87页 |
| ·山羊胎儿成纤维的分离与培养 | 第84-85页 |
| ·山羊胎儿成纤维细胞的性别鉴定 | 第85-86页 |
| ·转GH基因阳性细胞的筛选 | 第86页 |
| ·转GH基因阳性克隆细胞的鉴定 | 第86页 |
| ·体细胞核移植制备转GH基因奶山羊 | 第86-87页 |
| 3 讨论 | 第87-89页 |
| 参考文献 | 第89-93页 |
| 第五章 转GH基因奶山羊的鉴定 | 第93-113页 |
| 摘要 | 第93-94页 |
| 1 材料与方法 | 第94-102页 |
| ·材料 | 第94-95页 |
| ·试验材料 | 第94-95页 |
| ·试验仪器 | 第95页 |
| ·试验试剂 | 第95页 |
| ·方法 | 第95-102页 |
| ·转GH基因奶山羊全血基因组的提取 | 第95-96页 |
| ·PCR鉴定转GH基因奶山羊 | 第96-97页 |
| ·Southern-blot鉴定转GH基因奶山羊 | 第97-98页 |
| ·荧光定量PCR鉴定转GH基因奶山羊外源基因的拷贝数 | 第98-99页 |
| ·转GH基因奶山羊外源基因在基因组中的整合位点检测 | 第99-102页 |
| 2 结果与分析 | 第102-108页 |
| ·PCR鉴定转GH基因奶山羊 | 第102-103页 |
| ·Southern-blot印记杂交鉴定转GH基因奶山羊 | 第103-105页 |
| ·探针的制备 | 第103页 |
| ·DNA酶切电泳及转膜印记 | 第103-105页 |
| ·荧光定量PCR测定转GH基因奶山羊插入基因拷贝数 | 第105-106页 |
| ·转GH基因奶山羊外源基因整合位点的检测 | 第106-108页 |
| ·TAIL-PCR对整合位点的克隆 | 第106页 |
| ·测序与序列分析 | 第106-108页 |
| ·旁侧PCR对整合位点的验证结果 | 第108页 |
| 3 讨论 | 第108-110页 |
| 参考文献 | 第110-113页 |
| 第六章 转GH基因奶山羊的初步安全性评价 | 第113-131页 |
| 摘要 | 第113-115页 |
| 1 材料与方法 | 第115-118页 |
| ·材料 | 第115-116页 |
| ·试验材料 | 第115页 |
| ·试验仪器 | 第115页 |
| ·试验试剂 | 第115-116页 |
| ·方法 | 第116-118页 |
| ·奶山羊生长发育测定 | 第116页 |
| ·奶山羊生理生化分析方法 | 第116-117页 |
| ·转GH基因奶山羊乳腺发育情况 | 第117页 |
| ·转GH基因奶山羊乳中GH的表达检测及乳成分分析 | 第117-118页 |
| 2 结果与分析 | 第118-126页 |
| ·转GH基因奶山羊生长发育状况分析 | 第118-119页 |
| ·转GH基因奶山羊血常规及血液生理生化指标检测分析 | 第119-120页 |
| ·转GH基因奶山羊乳腺发育情况统计分析 | 第120-122页 |
| ·转GH基因奶山羊乳成分分析及乳中GH表达检测 | 第122-124页 |
| ·转GH基因奶山羊泌乳初期产奶量及乳成分分析 | 第122-123页 |
| ·转GH基因奶山羊乳中GH表达检测 | 第123-124页 |
| ·转GH基因奶山羊羊奶对小羊生长发育的影响 | 第124-125页 |
| ·转GH基因奶山羊羊奶对小羊生理影响 | 第125-126页 |
| 3 讨论 | 第126-128页 |
| 参考文献 | 第128-131页 |
| 全文结论 | 第131-133页 |
| 本文创新点 | 第133-135页 |
| 论文发表情况 | 第135-137页 |
| 致谢 | 第137页 |
