| 中文摘要 | 第1-12页 |
| ABSTRACT | 第12-14页 |
| 第一章 文献综述 | 第14-23页 |
| ·组蛋白分子伴侣Asf1研究进展 | 第14-20页 |
| ·组蛋白分子伴侣家族概述 | 第14-15页 |
| ·Asf1的概述 | 第15页 |
| ·Asf1的结构 | 第15-16页 |
| ·Asf1的生物学功能 | 第16-20页 |
| ·四膜虫概述 | 第20-21页 |
| ·本课题的研究意义 | 第21-23页 |
| 第二章 嗜热四膜虫中ASF1基因的鉴定及其序列分析 | 第23-33页 |
| ·前言 | 第23页 |
| ·材料 | 第23-25页 |
| ·菌株和质粒 | 第23页 |
| ·主要试剂 | 第23-24页 |
| ·试剂配制 | 第24页 |
| ·实验仪器 | 第24-25页 |
| ·引物 | 第25页 |
| ·方法 | 第25-29页 |
| ·嗜热四膜虫的培养、饥饿以及交配 | 第25-26页 |
| ·嗜热四膜虫总RNA提取 | 第26页 |
| ·嗜热四膜虫ASF1基因克隆 | 第26-28页 |
| ·ASF1基因的表达谱分析 | 第28-29页 |
| ·Asf1蛋白序列及聚类分析 | 第29页 |
| ·结果 | 第29-32页 |
| ·ASF1基因序列克隆 | 第29-30页 |
| ·ASF1基因的表达谱分析 | 第30-31页 |
| ·Asf1蛋白序列及进化分析 | 第31-32页 |
| ·讨论 | 第32-33页 |
| 第三章 嗜热四膜虫中Asf1亚细胞定位分析 | 第33-51页 |
| ·前言 | 第33页 |
| ·材料 | 第33-35页 |
| ·菌株和质粒 | 第33页 |
| ·试剂与工具酶 | 第33页 |
| ·引物 | 第33-34页 |
| ·主要仪器 | 第34页 |
| ·主要试剂配制 | 第34-35页 |
| ·方法 | 第35-46页 |
| ·嗜热四膜虫细胞的培养、饥饿和交配 | 第35页 |
| ·嗜热四膜虫中pXS-ASF1过表达载体的构建 | 第35-37页 |
| ·嗜热四膜虫pNeo-HA-ASF1重组载体的构建 | 第37-43页 |
| ·嗜热四膜虫细胞转化 | 第43-44页 |
| ·阳性克隆的筛选 | 第44页 |
| ·嗜热四膜虫基因组的快速提取与PCR鉴定 | 第44-45页 |
| ·免疫荧光定位 | 第45-46页 |
| ·结果 | 第46-49页 |
| ·重组质粒pNeo-HA-ASF1的构建及鉴定 | 第46-47页 |
| ·内源HA-Asf1在嗜热四膜虫中的定位 | 第47-48页 |
| ·过表达的HA-Asf1在嗜热四膜中的定位 | 第48-49页 |
| ·讨论 | 第49-51页 |
| 第四章 嗜热四膜虫中Asf1异常表达影响细胞核稳定性 | 第51-62页 |
| ·前言 | 第51页 |
| ·材料 | 第51-52页 |
| ·菌株和质粒 | 第51页 |
| ·试剂与工具酶 | 第51页 |
| ·实验所用引物 | 第51-52页 |
| ·主要实验仪器 | 第52页 |
| ·主要试剂配制 | 第52页 |
| ·方法 | 第52-53页 |
| ·嗜热四膜虫细胞的培养 | 第52页 |
| ·Asf1蛋白免疫印迹 | 第52页 |
| ·pXS-ASF1过表达载体的构建 | 第52-53页 |
| ·pNeo-ASF1敲除载体的构建 | 第53页 |
| ·嗜热四膜虫细胞转化 | 第53页 |
| ·阳性克隆的筛选 | 第53页 |
| ·实时荧光定量PCR | 第53页 |
| ·DAPI染色 | 第53页 |
| ·结果 | 第53-60页 |
| ·pXS-ASF1过表达载体的构建及其重组鉴定 | 第53-55页 |
| ·Cd~(2+)不同浓度诱导下ASF1基因的转录水平测定 | 第55-56页 |
| ·过表达ASF1对四膜虫增值的影响 | 第56页 |
| ·过表达ASF1影响四膜虫的核大小 | 第56-57页 |
| ·pNeo-ASF1载体的构建及其重组鉴定 | 第57-58页 |
| ·敲减株ASF1基因转录水平的分析 | 第58-59页 |
| ·敲减ASF1对细胞增殖的影响 | 第59页 |
| ·ASF1敲减影响细胞核的形态 | 第59-60页 |
| ·讨论 | 第60-62页 |
| 参考文献 | 第62-68页 |
| 总结与展望 | 第68-70页 |
| 攻读学位期间取得的硏究成果 | 第70-71页 |
| 致谢 | 第71-72页 |
| 个人简况及联系方式 | 第72-73页 |
| 承诺书 | 第73-74页 |
