| 摘要 | 第1-5页 |
| ABSTRACT | 第5-9页 |
| 1 前言 | 第9-21页 |
| ·亲和层析介质 | 第9页 |
| ·谷胱甘肽亲和层析介质的特点 | 第9-10页 |
| ·谷胱甘肽亲和层析介质的研究进展 | 第10-11页 |
| ·丙氨酸脱氢酶的分布 | 第11页 |
| ·丙氨酸脱氢酶的生物学功能 | 第11-12页 |
| ·丙氨酸脱氢酶的催化机理 | 第12-13页 |
| ·丙氨酸脱氢酶的结构研究 | 第13-19页 |
| ·蛋白的表达 | 第13-14页 |
| ·蛋白的纯化 | 第14-15页 |
| ·蛋白晶体的获得 | 第15-18页 |
| ·晶体数据收集与处理 | 第18-19页 |
| ·丙氨酸脱氢酶的研究进展 | 第19页 |
| ·论文立题的背景,内容及意义 | 第19-21页 |
| ·论文立题背景 | 第19-20页 |
| ·研究内容及意义 | 第20-21页 |
| 2 材料与方法 | 第21-39页 |
| ·实验材料 | 第21-28页 |
| ·实验常用生化试剂 | 第21-22页 |
| ·实验仪器 | 第22-23页 |
| ·试剂盒、工具酶及分子量Marker | 第23-24页 |
| ·缓冲液和常用培养基的配制 | 第24-27页 |
| ·丙氨酸脱氢酶基因及其他菌株来源 | 第27-28页 |
| ·表达宿主和载体 | 第28页 |
| ·实验方法 | 第28-39页 |
| ·琼脂糖4 FF凝胶颗粒的活化 | 第28-29页 |
| ·活化的Sepharose 4 Fast Flow凝胶颗粒偶联GSH | 第29页 |
| ·终止偶联反应 | 第29页 |
| ·谷胱甘肽亲和层析介质的性能评价 | 第29-30页 |
| ·丙氨酸脱氢酶重组质粒的构建 | 第30-35页 |
| ·丙氨酸脱氢酶的表达纯化 | 第35-37页 |
| ·丙氨酸脱氢酶结晶条件的初筛及优化 | 第37页 |
| ·丙氨酸脱氢酶蛋白晶体数据收集与处理 | 第37-39页 |
| 3 结果与讨论 | 第39-56页 |
| ·琼脂糖凝胶活化条件的优化 | 第39-41页 |
| ·无水反应体系对活化的影响 | 第39页 |
| ·温度对活化的影响 | 第39-40页 |
| ·NaOH浓度对活化的影响 | 第40页 |
| ·活化时间的影响 | 第40-41页 |
| ·GSH偶联的优化 | 第41-42页 |
| ·GSH层析介质性能 | 第42-45页 |
| ·稳定性测试 | 第42-43页 |
| ·载量测试 | 第43-45页 |
| ·与GE介质层析效果对照 | 第45页 |
| ·丙氨酸脱氢酶Ald_WSH-002重组质粒的构建 | 第45-47页 |
| ·PCR扩增产物的鉴定 | 第45-46页 |
| ·Ald_BM WSH-002重组质粒的鉴定 | 第46-47页 |
| ·Ald_WSH-002重组质粒测序结果 | 第47页 |
| ·丙氨酸脱氢酶Ald_WSH-002的表达纯化 | 第47-50页 |
| ·试表达 | 第47-48页 |
| ·扩大化表达及纯化 | 第48-50页 |
| ·丙氨酸脱氢酶Ald_WSH-002结晶条件的筛选及优化 | 第50-51页 |
| ·蛋白结晶条件的初步筛选 | 第50页 |
| ·蛋白晶体的优化 | 第50-51页 |
| ·丙氨酸脱氢酶Ald_WSH-002蛋白晶体衍射数据收集与处理 | 第51-53页 |
| ·丙氨酸脱氢酶Ald_WSH-002蛋白的结构解析 | 第53-56页 |
| ·Ald_WSH-002蛋白的结构 | 第53页 |
| ·与其他丙氨酸脱氢酶氨基酸序列比对及结构比较 | 第53-54页 |
| ·Ald蛋白活性区域 | 第54-56页 |
| 4 结论 | 第56-57页 |
| 5 展望 | 第57-58页 |
| 6 参考文献 | 第58-64页 |
| 7 攻读硕士学位期间发表的论文 | 第64-65页 |
| 8 致谢 | 第65-66页 |
| 附录 | 第66-67页 |
