缩略词表 | 第1-6页 |
摘要 | 第6-8页 |
Abstract | 第8-10页 |
前言 | 第10-13页 |
材料与方法 | 第13-23页 |
1 材料与来源 | 第13-14页 |
·菌株、质粒和细胞系 | 第13页 |
·主要试剂 | 第13页 |
·主要仪器设备 | 第13页 |
·抗体 | 第13-14页 |
·细胞培养和转染 | 第14页 |
2 实验方法 | 第14-23页 |
·流式细胞分析细胞周期的处理方法 | 第14-15页 |
·细胞周期同步化方法 | 第15页 |
·免疫印迹杂交实验(Western Blot) | 第15-16页 |
·His 标签蛋白的诱导与纯化方法 | 第16页 |
·BrdU 掺入及染色方法 | 第16-17页 |
·Cyclin E/CDK2 体外激酶实验方法 | 第17-18页 |
·体外泛素化实验方法 | 第18-19页 |
·质谱样品制备及银染方法 | 第19-21页 |
·紫外线照射处理细胞方法 | 第21页 |
·细胞中 Flag 标签蛋白染色方法 | 第21页 |
·皮肤癌免疫组化实验流程 | 第21-23页 |
实验结果 | 第23-39页 |
第一部分 紫外线诱导 CUEDC2 蛋白降解促进 G1 期阻滞 | 第23-31页 |
1. CUEDC2 蛋白在紫外照射诱导的 G1 期阻滞中发生降解 | 第23-26页 |
·紫外照射引起 CUEDC2 蛋白量下调 | 第23页 |
·紫外照射特异性引起 CUEDC2 蛋白发生降解 | 第23-24页 |
·过表达 CUEDC2 蛋白能够逆转紫外诱导的 G1 期阻滞 | 第24-26页 |
2. 紫外照射时 CUEDC2 能够调控 Cyclin A 的蛋白量和 CDK2 的活性 | 第26-28页 |
·过表达 CUEDC2 能够逆转紫外照射导致的 CDK2 灭活 | 第26页 |
·紫外照射能够明显下调 Cyclin A 的蛋白量 | 第26-27页 |
·紫外照射时 CUEDC2 能够部分恢复 Cyclin A 的蛋白量 | 第27-28页 |
3. 过表达 Cyclin A 蛋白可以逆转紫外诱导的 G1 期阻滞 | 第28-29页 |
4. CUEDC2 结合 Cdh1 并调控 APC/C~(Cdh1)的活性 | 第29-31页 |
第二部分 E3 连接酶 TRIM21 介导了 UV 诱导的 CUEDC2 蛋白降解 | 第31-39页 |
1. UV 诱导 CUEDC2 蛋白发生泛素化降解 | 第31-32页 |
2. UV 诱导 CUEDC2 蛋白降解不依赖于经典的 DNA 损伤信号通路 | 第32-33页 |
3. 质谱筛选结果发现 CUEDC2 能够结合 E3 连接酶 TRIM21 | 第33-35页 |
4. TRIM21 介导 CUEDC2 蛋白发生泛素化降解 | 第35-36页 |
5. CUEDC2 蛋白在皮肤癌组织中高表达 | 第36-39页 |
讨论 | 第39-43页 |
结论 | 第43-45页 |
参考文献 | 第45-49页 |
文献综述 | 第49-56页 |
参考文献 | 第53-56页 |
发表文章 | 第56-58页 |
个人简历 | 第58-59页 |
致谢 | 第59-60页 |