| 摘要 | 第1-9页 |
| 前言 | 第9-10页 |
| 文献综述 | 第10-19页 |
| 1 Musclin基因的研究进展 | 第10-13页 |
| ·Musclin基因的发现 | 第10-11页 |
| ·Musclin基因的结构 | 第11-12页 |
| ·Musclin基因的生物学功能 | 第12-13页 |
| 2 RNAi的研究进展 | 第13-19页 |
| ·RNAi的发现 | 第13-14页 |
| ·RNAi的机理 | 第14-17页 |
| ·RNAi技术的应用 | 第17-19页 |
| ·RNAi在基因功能研究中的应用 | 第17页 |
| ·RNAi在治疗中的应用 | 第17-18页 |
| ·RNAi在转基因动物中的应用 | 第18-19页 |
| 本研究的立项依据和研究意义 | 第19-20页 |
| 试验一 Musclin基因的过表达和转录后沉默在小鼠C2C12成肌细胞中的表达 | 第20-38页 |
| 1 试验材料 | 第20-21页 |
| ·动物细胞、质粒和siRNA | 第20页 |
| ·细胞试验相关试剂和分子生化试剂 | 第20页 |
| ·试验仪器 | 第20页 |
| ·常用试剂与缓冲液的配制 | 第20-21页 |
| 2 试验方法 | 第21-26页 |
| ·小鼠C2C12成肌细胞的冻存与复苏 | 第21页 |
| ·小鼠C2C12成肌细胞的传代培养 | 第21-22页 |
| ·制备无内毒素质粒DNA | 第22-23页 |
| ·小鼠C2C12成肌细胞的培养及质粒载体和siRNA的转染 | 第23页 |
| ·小鼠C2C12成肌细胞RNA的提取 | 第23-24页 |
| ·实时荧光定量PCR | 第24-26页 |
| ·关于荧光定量PCR的引物 | 第24-25页 |
| ·荧光定量PCR反应体系及反应条件 | 第25页 |
| ·数据处理与统计分析 | 第25-26页 |
| 3 结果与分析 | 第26-35页 |
| ·小鼠C2C12成肌细胞培养 | 第26页 |
| ·小鼠C2C12成肌细胞的鉴定和预转染 | 第26-28页 |
| ·小鼠C2C12成肌细胞RNA提取结果 | 第28-29页 |
| ·Musclin荧光定量PCR结果 | 第29-31页 |
| ·Musclin基因扩增动力学曲线和溶解曲线 | 第29-30页 |
| ·不同转染组对Musclin mRNA表达的差异 | 第30-31页 |
| ·Smad3和Myostatin基因荧光定量PCR结果 | 第31-35页 |
| ·Smad3和Myostatin基因扩增动力学曲线和溶解曲线 | 第31-33页 |
| ·不同转染组Smad3 mRNA表达的差异 | 第33-34页 |
| ·不同转染组Myostatin mRNA表达的差异 | 第34-35页 |
| 4 讨论 | 第35-38页 |
| ·关于荧光定量PCR | 第35页 |
| ·Musclin基因的过表达和RNAi沉默效果 | 第35-36页 |
| ·Musclin基因表达变化对Smad3和Myostatin基因表达的影响 | 第36-38页 |
| 试验二 绵羊Musclin基因cDNA的克隆及其真核表达载体的构建 | 第38-52页 |
| 1 试验材料 | 第38-39页 |
| ·试验材料、菌株和质粒载体 | 第38页 |
| ·分子试验生化试剂 | 第38页 |
| ·主要仪器与设备 | 第38页 |
| ·常用试剂及其配制 | 第38-39页 |
| 2 试验方法 | 第39-46页 |
| ·绵羊Musclin cDNA的扩增及克隆 | 第39-46页 |
| ·普通PCR扩增的反应体系 | 第40页 |
| ·琼脂糖凝胶电泳 | 第40-41页 |
| ·琼脂糖凝胶回收目的片段 | 第41页 |
| ·目的片段与质粒载体的连接反应 | 第41-42页 |
| ·质粒DNA及连接产物的转化 | 第42页 |
| ·质粒的小量提取 | 第42页 |
| ·重组质粒的鉴定方法 | 第42-44页 |
| ·质粒DNA的酶切鉴定及菌种保存 | 第44-45页 |
| ·绵羊pcDNA3.1(+)-Musclin真核表达载体的构建过程 | 第45-46页 |
| 3 结果与分析 | 第46-51页 |
| ·绵羊Musclin基因PCR扩增 | 第46-47页 |
| ·绵羊Musclin基因的克隆 | 第47-49页 |
| ·绵羊pcDNA3.1(+)-Musclin真核表达载体构建结果 | 第49-51页 |
| 4 讨论 | 第51-52页 |
| ·关于PCR反应 | 第51页 |
| ·关于限制性内切酶的选择 | 第51-52页 |
| 结论 | 第52-53页 |
| 参考文献 | 第53-57页 |
| Abstract | 第57-59页 |
| 附录 | 第59-61页 |
| 致谢 | 第61页 |
