| 摘要 | 第1-5页 |
| Abstract | 第5-10页 |
| 第一章 文献综述 | 第10-23页 |
| ·人参皂苷 | 第10-12页 |
| ·人参及人参皂苷 | 第10-11页 |
| ·人参皂苷的药理学作用与特点 | 第11-12页 |
| ·对心血管的作用 | 第11页 |
| ·对糖尿病的作用 | 第11页 |
| ·对物质代谢作用 | 第11页 |
| ·影响垂体一肾上腺皮质系统 | 第11-12页 |
| ·促性腺作用 | 第12页 |
| ·人参的药理学特点 | 第12页 |
| ·人参皂苷的分类及结构 | 第12-13页 |
| ·人参皂苷的分类 | 第12页 |
| ·人参皂苷的结构 | 第12-13页 |
| ·人参皂苷的生物转化 | 第13-14页 |
| ·人参皂苷的酶法转化 | 第13-14页 |
| ·人参皂苷葡萄糖苷酶的研究现状 | 第14页 |
| ·RNA的提取 | 第14-15页 |
| ·PCR扩增 | 第15-16页 |
| ·RACE技术 | 第16-20页 |
| ·RACE技术简介 | 第16-17页 |
| ·RACE技术的优点 | 第17-18页 |
| ·实验室现有的RACE试剂盒的简介 | 第18页 |
| ·RACE引物的设计 | 第18页 |
| ·RACE技术中的常见问题及对策 | 第18-20页 |
| ·RACE技术的其他应用及其前景 | 第20页 |
| ·序列的测定与分析 | 第20-21页 |
| ·序列的测定 | 第20-21页 |
| ·序列的分析 | 第21页 |
| ·人参皂苷葡萄糖苷酶 | 第21-22页 |
| ·本论文的主要研究内容及实验方案 | 第22-23页 |
| 第二章 材料与方法 | 第23-44页 |
| ·实验材料 | 第23-24页 |
| ·菌株 | 第23页 |
| ·培养基 | 第23页 |
| ·实验仪器与设备 | 第23-24页 |
| ·主要试剂 | 第24页 |
| ·实验方法 | 第24-34页 |
| ·菌种的液体培养 | 第25-27页 |
| ·麸皮浸出液的制备 | 第25页 |
| ·人参浸出液的制备 | 第25-26页 |
| ·培养时间 | 第26页 |
| ·液体培养基的配制 | 第26页 |
| ·接菌与培养 | 第26页 |
| ·酶液的酶活测定 | 第26页 |
| ·薄层层析 | 第26页 |
| ·SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳 | 第26-27页 |
| ·pNP系列酶活力研究 | 第27-28页 |
| ·a-淀粉酶酶活力研究 | 第28-29页 |
| ·蛋白质电印迹及蛋白质N-端序列的测定 | 第29-31页 |
| ·蛋白质电印迹(即蛋白质转膜) | 第29-30页 |
| ·蛋白质N-端序列的测定 | 第30页 |
| ·蛋白质肽质谱的测定 | 第30-31页 |
| ·RNA的提取与检测 | 第31-33页 |
| ·菌株的培养收集 | 第31页 |
| ·RNA的提取 | 第31-32页 |
| ·RNA的品质的检测 | 第32-33页 |
| ·琼脂糖凝胶电泳检测DNA或RNA | 第33-34页 |
| ·RNA的消化精制 | 第34页 |
| ·RNA的消化 | 第34页 |
| ·RNA的精制 | 第34页 |
| ·RACE方法扩增3’端和5’端 | 第34-44页 |
| ·引物的设计 | 第35页 |
| ·3 ’RACE反应 | 第35-37页 |
| ·5 ’RACE反应 | 第37-39页 |
| ·PCR产物回收 | 第39-40页 |
| ·人参皂苷葡萄糖苷酶基因片段的克隆 | 第40-42页 |
| ·PCR产物和载体的连接 | 第40页 |
| ·转化及重组子的筛选 | 第40-41页 |
| ·重组质粒的提取 | 第41-42页 |
| ·重组质粒DNA酶切检测 | 第42页 |
| ·序列分析 | 第42-44页 |
| 第三章 结果与讨论 | 第44-61页 |
| ·人参皂苷葡萄糖苷酶液体发酵培养 | 第44-45页 |
| ·液体发酵培养的培养基配比 | 第44-45页 |
| ·DEAE-Cellulose DE52柱分离纯化人参皂苷糖苷酶 | 第45-49页 |
| ·人参皂苷葡萄糖苷酶的分子量测定 | 第45-46页 |
| ·pNP系列酶活力的研究 | 第46-47页 |
| ·α-淀粉酶活力的研究 | 第47-48页 |
| ·酶活力测定 | 第48-49页 |
| ·sp.G8r总RNA的提取 | 第49-51页 |
| ·RNA的纯度和完整性 | 第49-50页 |
| ·RNA的琼脂糖凝胶电泳检测 | 第50页 |
| ·真菌RNA提取的方法讨论 | 第50-51页 |
| ·引物的设计与合成 | 第51-54页 |
| ·蛋白质电印迹及蛋白质N-端序列的测定 | 第51-52页 |
| ·蛋白质N-端序列的同源性比较 | 第51-52页 |
| ·蛋白质肽质谱的测定 | 第52-53页 |
| ·引物的设计 | 第53页 |
| ·引物的合成 | 第53-54页 |
| ·RACE反应 | 第54-55页 |
| ·5 ’RACE反应 | 第54页 |
| ·3 ’RACE反应 | 第54-55页 |
| ·目的基因全序列的调取与分析 | 第55-61页 |
| ·目的基因的开放阅读框确定 | 第56页 |
| ·RT-PCR反应 | 第56页 |
| ·测序分析 | 第56页 |
| ·gluGF CDS区的同源性比对 | 第56-61页 |
| ·gluGF CDS区编码的氨基酸序列与肽质谱同源性的比对 | 第57-61页 |
| 第四章 结论 | 第61-62页 |
| 参考文献 | 第62-65页 |
| 附录A | 第65-66页 |
| 附录B | 第66-67页 |
| 附录C | 第67-68页 |
| 附录D | 第68-69页 |
| 附录E | 第69-70页 |
| 附录F | 第70-71页 |
| 附录G | 第71-72页 |
| 致谢 | 第72页 |