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骨髓间充质干细胞抑制水通道蛋白4的上调减轻脑缺血诱发的脑水肿的分子机理研究

摘要第1-8页
ABSTRACT第8-11页
目录第11-13页
绪论第13-21页
 水通道蛋白 4(AQP4)第13-14页
 星形胶质细胞和 AQP4第14-15页
 脑水肿第15页
 小胶质细胞第15-17页
 骨髓间充质干细胞(MSCs)第17-19页
 丝裂原激活的蛋白激酶(MAPK)第19-21页
第一章 骨髓间充质干细胞分离,鉴定及示踪第21-30页
   ·引言第21-22页
   ·材料与方法第22-26页
     ·研究对象第22页
     ·主要材料和试剂第22-24页
     ·骨髓间充质干细胞分离与培养第24页
     ·骨髓间充质干细胞鉴定第24-25页
     ·Dil 示踪移植细胞第25-26页
     ·数据分析第26页
   ·实验结果第26-28页
     ·骨髓间充质干细胞的培养与形态第26-27页
     ·骨髓间充质干细胞鉴定第27-28页
     ·骨髓间充质干细胞示踪第28页
   ·讨论第28-30页
第二章 骨髓间充质干细胞对脑缺血后脑水肿及血脑屏障的影响第30-56页
   ·引言第30-31页
   ·材料与方法第31-45页
     ·研究对象第31页
     ·主要仪器和试剂第31-34页
     ·实验分组及设计第34页
     ·小鼠神经缺陷评估第34-35页
     ·脑水含量测定第35页
     ·脑组织伊文斯蓝(EB)渗出测定第35-36页
     ·免疫球蛋白 G 染色第36页
     ·免疫荧光第36-37页
     ·Real Time PCR第37-40页
     ·定量 PCR 数据分析第40页
     ·Western blot 检测第40-41页
     ·TUNEL 及星型胶质细胞双标第41-42页
     ·星形胶质细胞分离第42-43页
     ·MSC 条件培养基的准备第43页
     ·小胶质细胞条件培养基的准备第43页
     ·星形胶质细胞中 AQP4 干扰第43-44页
     ·AQP4 干扰对炎症条件下星形胶质细胞凋亡影响第44-45页
     ·星形胶质细胞和 bEnd.3 共培养及紧密连接蛋白表达检测第45页
     ·数据分析第45页
   ·实验结果第45-54页
     ·MSCs 提高神经行为学表现第45-46页
     ·MSCs 减少脑水肿第46-47页
     ·MSCs 保护血脑屏障的完整性第47-48页
     ·MSCs 减少闭合蛋白(occludin)和紧密连接蛋白-1(Zo-1)间隙形成第48-49页
     ·骨髓间充质干细胞降低脑缺血引起的 AQP4 表达上调第49-50页
     ·MSCs 降低脑缺血引起的星形胶质细胞的凋亡第50-51页
     ·AQP4 干扰效率检测第51-52页
     ·AQP4 干扰减少炎症引起的星形胶质细胞的凋亡第52-53页
     ·AQP4 干扰降低炎症引起的紧密连接蛋白 Occludin 表达下降第53-54页
   ·讨论第54-56页
第三章 骨髓间充质干细胞(MSCs)对水通道蛋白 4(AQP4)表达的调节作用及其可能机制第56-68页
   ·引言第56页
   ·材料与方法第56-61页
     ·研究对象第56-57页
     ·主要材料和试剂第57-59页
     ·实验分组及设计第59-60页
     ·MSC 条件培养基的准备第60页
     ·小胶质细胞条件培养基的准备第60页
     ·小胶质细胞 RNA 提取第60页
     ·星形胶质细胞分离和处理第60-61页
     ·体内 p38 抑制实验第61页
     ·数据分析第61页
   ·实验结果第61-66页
     ·骨髓间充质干细胞抑制炎症反应第61-62页
     ·小胶质细胞条件培养液对星形胶质细胞水通道蛋白 4 表达影响第62-63页
     ·小胶质细胞条件培养液能激活星形胶质细胞 p38 和 JNK MAPK 信号通路第63-64页
     ·p38,JNK MAPK 信号通路对 AQP4 上调影响第64-65页
     ·体内验证 P38 对 AQP4 表达影响第65-66页
   ·讨论第66-68页
全文总结第68-69页
结论第69-70页
参考文献第70-79页
附录第79-82页
攻读学位期间发表的学术论文第82-83页
致谢第83页

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