| 摘要 | 第1-7页 |
| Abstract | 第7-13页 |
| 英文缩略表 | 第13-14页 |
| 第一章 引言 | 第14-22页 |
| ·BT概览 | 第14-18页 |
| ·BTV病原学特征 | 第14-15页 |
| ·BTV全球分布和最近的变化 | 第15页 |
| ·BT临床症状、病理变化与致病机理 | 第15-16页 |
| ·BT的鉴别诊断 | 第16-17页 |
| ·BTV的分离 | 第16-17页 |
| ·抗原的鉴定 | 第17页 |
| ·抗体的鉴定 | 第17页 |
| ·BT防治现状 | 第17-18页 |
| ·BTV编码蛋白质及其功能 | 第18-20页 |
| ·BTV结构蛋白 | 第18-19页 |
| ·外层衣壳蛋白(VP2和VP5蛋白) | 第18页 |
| ·主要核心蛋白(VP3和VP7蛋白) | 第18-19页 |
| ·三个次要核心蛋白(VP1,VP4和VP6蛋白) | 第19页 |
| ·BTV的非结构蛋白 | 第19-20页 |
| ·BTV的生命周期 | 第20页 |
| ·本研究的目的与意义 | 第20-22页 |
| 第二章 BTV4 VP5蛋白的原核表达和鉴定 | 第22-27页 |
| ·实验材料 | 第22页 |
| ·病毒、细胞、质粒载体、感受态细胞和主要试剂 | 第22页 |
| ·引物设计 | 第22页 |
| ·实验方法 | 第22-24页 |
| ·BTV4病毒RNA的提取及S6的反转录、PCR扩增 | 第22-23页 |
| ·VP5蛋白原核表达载体的构建与鉴定 | 第23页 |
| ·VP5蛋白的原核表达以及SDS-PAGE鉴定 | 第23-24页 |
| ·重组VP5蛋白的纯化与Western-blot鉴定 | 第24页 |
| ·实验结果 | 第24-26页 |
| ·BTV4基因组的提取与S6基因的PCR扩增 | 第24-25页 |
| ·重组质粒 pMal-VP5的酶切鉴定和PCR鉴定 | 第25页 |
| ·SDS-PAGE和Western-blot对VP5蛋白进行鉴定 | 第25-26页 |
| ·讨论 | 第26-27页 |
| 第三章 BTV4 VP5蛋白的真核表达和鉴定 | 第27-33页 |
| ·实验材料 | 第27页 |
| ·细胞、质粒载体、感受态细胞及主要试剂 | 第27页 |
| ·引物设计 | 第27页 |
| ·实验方法 | 第27-29页 |
| ·BTV4 S6基因的扩增 | 第27页 |
| ·S6基因重组杆状病毒穿梭载体pFast-VP5质粒的构建 | 第27-28页 |
| ·S6基因重组杆粒的构建与鉴定 | 第28页 |
| ·重组质粒pFastBac-VP5转化进入DH10Bac~(TM) E.coli | 第28页 |
| ·提取重组杆粒 | 第28页 |
| ·PCR鉴定重组杆粒 | 第28页 |
| ·重组杆状病毒BACV-VP5的获得与扩增 | 第28-29页 |
| ·重组杆状病毒BACV-VP5在Sf21细胞中的表达和纯化 | 第29页 |
| ·Western-blot对VP5蛋白进行鉴定 | 第29页 |
| ·实验结果 | 第29-32页 |
| ·S6基因的扩增 | 第29-30页 |
| ·重组质粒pFast-VP5的构建与酶切鉴定 | 第30页 |
| ·重组杆粒BAC-VP5的PCR鉴定 | 第30页 |
| ·重组杆状病毒BACV-VP5的获得 | 第30-31页 |
| ·真核表达重组VP5蛋白的纯化与鉴定 | 第31-32页 |
| ·讨论 | 第32-33页 |
| 第四章 BTV4 VP5蛋白单克隆抗体的制备和鉴定 | 第33-39页 |
| ·实验材料 | 第33页 |
| ·实验方法 | 第33-34页 |
| ·小鼠免疫 | 第33页 |
| ·间接ELISA检测方法的建立 | 第33页 |
| ·细胞融合 | 第33-34页 |
| ·阳性杂交瘤细胞的克隆纯化与冻存复苏 | 第34页 |
| ·MAbs特性的鉴定 | 第34页 |
| ·实验结果 | 第34-38页 |
| ·间接ELISA检测方法的建立 | 第34-35页 |
| ·阳性杂交瘤细胞的获得 | 第35页 |
| ·MAbs鉴定特性 | 第35-38页 |
| ·Western blot鉴定 | 第35页 |
| ·IFA鉴定 | 第35-36页 |
| ·MAbs亚类鉴定 | 第36页 |
| ·阳性杂交瘤细胞及其MAbs稳定性鉴定 | 第36-38页 |
| ·讨论 | 第38-39页 |
| 第五章 BTV4 VP5蛋白抗原表位的鉴定 | 第39-47页 |
| ·实验材料 | 第39页 |
| ·质粒、菌株和主要试剂 | 第39页 |
| ·引物设计 | 第39页 |
| ·实验方法 | 第39-40页 |
| ·BTV4 VP5蛋白的分段截短表达 | 第39页 |
| ·BTV4 VP5蛋白抗原表位的鉴定 | 第39-40页 |
| ·BTV4 VP5蛋白抗原表位的保守性分析 | 第40页 |
| ·实验结果 | 第40-46页 |
| ·BTV4 VP5蛋白抗原表位的鉴定 | 第40页 |
| ·BTV4 VP5蛋白抗原表位的保守性分析 | 第40-46页 |
| ·讨论 | 第46-47页 |
| 第六章 全文结论 | 第47-48页 |
| 参考文献 | 第48-53页 |
| 致谢 | 第53-54页 |
| 作者简历 | 第54页 |
