| 目录 | 第1-8页 |
| 摘要 | 第8-10页 |
| ABSTRACT | 第10-13页 |
| 符号及缩写语 | 第13-14页 |
| 第一部分 文献综述 | 第14-34页 |
| 第一章 哺乳动物卵泡发育与卵母细胞成熟的调控 | 第14-34页 |
| 1 卵泡发育过程 | 第14-19页 |
| ·卵泡发育与卵泡结构 | 第14-15页 |
| ·卵巢原始卵泡库 | 第15-16页 |
| ·卵泡的募集、选择与优势化 | 第16页 |
| ·卵泡成熟与排卵 | 第16-17页 |
| ·卵泡闭锁 | 第17-18页 |
| ·卵泡细胞凋亡的检测 | 第18-19页 |
| ·细胞形态学观察 | 第18页 |
| ·DNA片段检测 | 第18-19页 |
| ·流式细胞仪检测 | 第19页 |
| ·TUNEL法检测 | 第19页 |
| 2 卵泡发育与闭锁的调控 | 第19-25页 |
| ·激素调控 | 第20-22页 |
| ·促性腺激素释放激素 | 第20页 |
| ·促性腺激素 | 第20-21页 |
| ·类固醇激素 | 第21-22页 |
| ·细胞因子调控 | 第22-24页 |
| ·表皮生长因子(EGF) | 第22-23页 |
| ·胰岛素样生长因子(IGF) | 第23页 |
| ·转化生长因子(TGF) | 第23-24页 |
| ·基因调控 | 第24-25页 |
| 3 卵子发生 | 第25-30页 |
| ·卵子发生的一般规律 | 第25-26页 |
| ·增殖期 | 第25页 |
| ·初级卵母细胞生长期 | 第25页 |
| ·成熟期 | 第25-26页 |
| ·卵母细胞成熟 | 第26-27页 |
| ·卵母细胞核成熟 | 第26页 |
| ·卵母细胞胞质成熟 | 第26-27页 |
| ·影响卵母细胞发育与成熟的因素 | 第27-28页 |
| ·成熟促进因子(MPF) | 第27-28页 |
| ·细胞静止因子(CSF) | 第28页 |
| ·成熟抑制因子(OMI) | 第28页 |
| ·卵母细胞的质量评价 | 第28-30页 |
| ·非侵袭性技术 | 第28-29页 |
| ·侵袭性技术 | 第29-30页 |
| 4 血管紧张肽Ⅱ在卵巢中的作用 | 第30-34页 |
| ·AngⅡ及其受体 | 第30-32页 |
| ·AngⅡ受体作用的信号通路 | 第32-33页 |
| ·AngⅡ在卵巢中的作用 | 第33-34页 |
| ·AngⅡ对排卵的影响 | 第33页 |
| ·AngⅡ对类固醇激素合成的影响 | 第33-34页 |
| 第二部分 试验研究 | 第34-60页 |
| 第二章 血管紧张肽Ⅱ对猪卵泡和卵母细胞体外发育的影响 | 第34-50页 |
| 摘要 | 第34-35页 |
| 1 材料 | 第35-39页 |
| ·主要仪器设备 | 第35-36页 |
| ·主要试剂及药品 | 第36-37页 |
| ·主要试剂的配置 | 第37-39页 |
| ·血管紧张肽Ⅱ的配制 | 第37页 |
| ·TCM199培养液配制 | 第37页 |
| ·PBS的配制 | 第37页 |
| ·PMSG和hCG的配制 | 第37页 |
| ·改良Tris缓冲液(mTBM)的配制 | 第37-38页 |
| ·ZO液的配制 | 第38页 |
| ·猪卵泡液(pFF)的制备 | 第38页 |
| ·二乙酸荧光素(FDA)贮存液配制 | 第38页 |
| ·其他试剂的配制 | 第38-39页 |
| 2 方法 | 第39-43页 |
| ·卵巢来源 | 第39页 |
| ·完整有腔卵泡的分离及体外培养 | 第39页 |
| ·颗粒细胞的收集与凋亡率检测 | 第39-40页 |
| ·颗粒细胞收集 | 第39页 |
| ·Annexin V-FITC/PI细胞凋亡率检测 | 第39-40页 |
| ·卵母细胞采集 | 第40页 |
| ·卵母细胞体外成熟培养(IVM) | 第40页 |
| ·成熟卵母细胞的判定 | 第40页 |
| ·卵母细胞直径及存活率的检测 | 第40-41页 |
| ·卵母细胞直径的测量 | 第40-41页 |
| ·卵母细胞存活率的检测 | 第41页 |
| ·体外受精(IVF) | 第41-42页 |
| ·卵母细胞准备 | 第41页 |
| ·精子的处理 | 第41页 |
| ·胚胎体外培养 | 第41-42页 |
| ·试验设计与分组 | 第42页 |
| ·AngⅡ对猪有腔卵泡体外发育的影响 | 第42页 |
| ·AngⅡ对培养卵泡卵母细胞直径与存活率的影响 | 第42页 |
| ·AngⅡ对培养COC卵母细胞直径与存活率的影响 | 第42页 |
| ·AngⅡ对猪COC体外发育能力的影响 | 第42页 |
| ·数据统计与分析 | 第42-43页 |
| 3 结果 | 第43-46页 |
| ·AngⅡ添加浓度对体外培养猪有腔卵泡颗粒细胞凋亡率的影响 | 第43-44页 |
| ·添加AngⅡ对培养卵泡卵母细胞直径与存活率的影响 | 第44-45页 |
| ·AngⅡ对猪COC体外培养的作用 | 第45-46页 |
| ·AngⅡ对猪COC体外发育能力的影响 | 第46页 |
| 4 讨论 | 第46-48页 |
| 5 小结 | 第48-50页 |
| 第三章 血管紧张肽Ⅱ影响猪卵母细胞发育与成熟的机理 | 第50-60页 |
| 摘要 | 第50-51页 |
| 1 材料 | 第51-53页 |
| ·主要仪器 | 第51-52页 |
| ·主要试剂 | 第52页 |
| ·试剂的配制 | 第52-53页 |
| ·无RNA酶水配制 | 第52页 |
| ·Tris-硼酸电泳液缓冲液(TBE)配制 | 第52页 |
| ·1.5%琼脂糖胶的配制 | 第52-53页 |
| 2 方法 | 第53-56页 |
| ·COC样品采集 | 第53页 |
| ·引物合成与溶解 | 第53页 |
| ·引物的序列与合成 | 第53页 |
| ·引物溶解 | 第53页 |
| ·样品总RNA的提取与检测 | 第53-55页 |
| ·实验前的准备 | 第53-54页 |
| ·总RNA的提取 | 第54页 |
| ·RNA完整性检测 | 第54-55页 |
| ·反转录(RT) | 第55页 |
| ·琼脂糖凝胶电泳 | 第55页 |
| ·Real time PCR反应 | 第55-56页 |
| ·荧光定量PCR反应体系与反应条件 | 第55-56页 |
| ·数据统计分析 | 第56页 |
| 3 结果 | 第56-59页 |
| ·RNA完整性检测 | 第56-57页 |
| ·cDNA琼脂糖凝胶电泳 | 第57页 |
| ·扩增曲线与溶解曲线 | 第57-58页 |
| ·猪COC表皮调节因子(EREG)的表达 | 第58-59页 |
| 4 讨论 | 第59页 |
| 5 小结 | 第59-60页 |
| 全文总结 | 第60-62页 |
| 参考文献 | 第62-74页 |
| 致谢 | 第74页 |
