| 目录 | 第1-9页 |
| 摘要 | 第9-11页 |
| ABSTRACT | 第11-14页 |
| 符号及縮略语 | 第14-15页 |
| 第一部分 文献综述 | 第15-39页 |
| 第一章 哺乳动物体细胞核移植的研究与应用 | 第15-39页 |
| 1 哺乳动物体细胞核移植研究概况 | 第15-16页 |
| 2 体细胞核移植的技术程序 | 第16-29页 |
| ·受体细胞的选择和去核 | 第16-19页 |
| ·盲吸法 | 第17页 |
| ·切割法 | 第17页 |
| ·荧光引导去核法 | 第17页 |
| ·化学法 | 第17-18页 |
| ·极性偏振光显核法 | 第18页 |
| ·Pol-Scope法 | 第18页 |
| ·离心法 | 第18页 |
| ·末期去核法 | 第18-19页 |
| ·徒手切割法 | 第19页 |
| ·供核细胞准备 | 第19-20页 |
| ·克隆重构胚构建 | 第20-21页 |
| ·胞质内注射法 | 第20-21页 |
| ·带下注射-融合 | 第21页 |
| ·其它方法 | 第21页 |
| ·重构胚激活 | 第21-22页 |
| ·电激活 | 第22页 |
| ·化学激活 | 第22页 |
| ·重构胚体外培养 | 第22-23页 |
| ·影响体细胞核移植的因素 | 第23-29页 |
| ·受体细胞和供核细胞的核质互作 | 第24-25页 |
| ·体细胞供体核重编程 | 第25页 |
| ·DNA甲基化 | 第25-27页 |
| ·组蛋白乙酰化 | 第27页 |
| ·基因组印记 | 第27-28页 |
| ·端粒问题 | 第28-29页 |
| 3 体细胞核移植与转基因动物生产 | 第29-37页 |
| ·转基因动物研究现状 | 第30页 |
| ·转基因动物制作方法 | 第30-35页 |
| ·显微注射法 | 第30-31页 |
| ·体细胞核移植法 | 第31-32页 |
| ·逆转录病毒感染法 | 第32页 |
| ·胚胎干细胞法 | 第32-33页 |
| ·RNA干涉转基因技术 | 第33页 |
| ·精子载体法 | 第33-34页 |
| ·基因打靶技术 | 第34页 |
| ·诱导多能干细胞转基因研究 | 第34-35页 |
| ·转基因技术应用 | 第35-37页 |
| ·建立研究基因功能和治疗人类疾病的动物模型 | 第35-36页 |
| ·动物抗病育种 | 第36页 |
| ·异种器官移植 | 第36页 |
| ·生物制药 | 第36-37页 |
| 4 动物转基因克隆的前景 | 第37-39页 |
| 第二部分 试验研究 | 第39-65页 |
| 第二章 猪转基因克隆技术程序的优化 | 第39-57页 |
| 摘要 | 第39页 |
| 1 材料 | 第39-45页 |
| ·主要仪器设备 | 第39-40页 |
| ·主要试剂及药品 | 第40-41页 |
| ·试剂配置 | 第41-43页 |
| ·TCM-199液配制 | 第41页 |
| ·Hoechst33342染液 | 第41-42页 |
| ·激素贮存液配制 | 第42页 |
| ·DMEM溶液 | 第42页 |
| ·无钙镁DPBS液 | 第42页 |
| ·胰酶消化液的配制 | 第42页 |
| ·胚胎培养液PZM-3 | 第42页 |
| ·融合激活液 | 第42-43页 |
| ·显微操作液：无钙H-NCSU-23 | 第43页 |
| ·工具的制备 | 第43-45页 |
| ·显微操作针的制备 | 第43-45页 |
| 2 试验方法 | 第45-50页 |
| ·卵母细胞采集 | 第45页 |
| ·猪卵母细胞的体外成熟培养 | 第45-46页 |
| ·猪耳成纤维细胞和胎儿成纤维细胞的建系和培养 | 第46-47页 |
| ·胎儿成纤维细胞分离传代培养 | 第46页 |
| ·猪儿成纤维细胞分离传代培养 | 第46-47页 |
| ·细胞的冷冻保存 | 第47页 |
| ·抗猪繁殖与呼吸综合征病毒转基因细胞系的建立 | 第47-48页 |
| ·转基因供体细胞细胞周期同期化 | 第48页 |
| ·体细胞核移植 | 第48-49页 |
| ·转基因供体细胞的准备 | 第48页 |
| ·受体细胞的准备 | 第48页 |
| ·重构胚的构建 | 第48-49页 |
| ·电融合激活 | 第49页 |
| ·重构胚的体外培养 | 第49页 |
| ·试验设计 | 第49-50页 |
| ·激素处理时间对猪卵母细胞成熟发育的影响 | 第49页 |
| ·细胞周期同期化处理供体细胞对克隆胚胎发育的影响 | 第49-50页 |
| ·比较细胞的保存方式对猪胚胎发育的影响 | 第50页 |
| ·不同激活方案对转基因克隆胚胎发育的影响 | 第50页 |
| ·统计分析 | 第50页 |
| 3 结果 | 第50-52页 |
| ·激素处理对猪卵母细胞成熟的影响 | 第50-51页 |
| ·细胞周期同期化处理对猪转基因克隆胚胎发育的影响 | 第51页 |
| ·供核细胞保存方式对猪转基因克隆胚胎发育的影响 | 第51-52页 |
| ·激活方法对猪转基因克隆胚胎发育的影响 | 第52页 |
| 4 讨论 | 第52-57页 |
| ·激素处理对猪卵母细胞成熟的影响 | 第52-53页 |
| ·细胞周期同期化处理对猪转基因克隆胚胎发育的影响 | 第53页 |
| ·供核细胞保存方式对猪转基因克隆胚胎发育的影响 | 第53-54页 |
| ·激活方法对猪转基因克隆胚胎发育的影响 | 第54-57页 |
| 第三章 抗猪蓝耳病shRNA转基因克隆胚胎体外生产 | 第57-65页 |
| 摘要 | 第57页 |
| 1 材料 | 第57-58页 |
| ·主要仪器设备 | 第57页 |
| ·主要试剂及药品 | 第57-58页 |
| ·试剂配置 | 第58页 |
| ·工具的制备 | 第58页 |
| 2 试验方法 | 第58-60页 |
| ·猪卵母细胞采集和体外成熟培养 | 第58页 |
| ·供核细胞准备 | 第58-59页 |
| ·受体细胞准备 | 第59页 |
| ·核移植操作 | 第59页 |
| ·重构胚激活 | 第59页 |
| ·重构胚体外培养 | 第59-60页 |
| ·试验设计 | 第60页 |
| ·转基因供体对猪转基因胚胎发育的影响 | 第60页 |
| ·TSA对猪转基因克隆胚胎发育的影响 | 第60页 |
| ·统计分析 | 第60页 |
| 3 结果 | 第60-62页 |
| ·转基因核供核细胞对猪转基因胚胎早期发育的影响 | 第60-61页 |
| ·TSA处理对猪转基因克隆胚胎发育的影响 | 第61-62页 |
| ·TSA处理转基因核供核细胞对猪克隆胚胎发育的影响 | 第61页 |
| ·TSA处理胚胎对猪转基因克隆胚胎发育的影响 | 第61-62页 |
| ·TSA同时处理供核细胞与胚胎对猪转基因克隆胚胎发育的影响 | 第62页 |
| 4 讨论 | 第62-65页 |
| ·不同转基因核供核细胞对猪转基因克隆胚胎发育的影响 | 第62-63页 |
| ·TSA处理对猪转基因克隆胚胎发育的影响 | 第63-65页 |
| 参考文献 | 第65-77页 |
| 全文结论 | 第77-79页 |
| 图版及说明 | 第79-83页 |
| 致谢 | 第83页 |
