| 中文摘要 | 第1-7页 |
| Abstract | 第7-13页 |
| 第一章 前言 | 第13-24页 |
| 第一节 iPS细胞研究概况 | 第13-18页 |
| ·iPS细胞系的建立 | 第13-17页 |
| ·iPS猪的国际发展态势及进展 | 第17-18页 |
| 第二节 端粒 | 第18-22页 |
| ·末端端粒 | 第18-20页 |
| ·中间端粒(intersttitical telomeric sequences,ITSs) | 第20页 |
| ·端粒酶 | 第20-21页 |
| ·端粒延长替代机制(ALT) | 第21-22页 |
| 第三节 研究的目的和意义 | 第22-24页 |
| 第二章 猪多能性干细胞系的建立 | 第24-57页 |
| 第一节 导言 | 第24-25页 |
| 第二节 材料和方法 | 第25-36页 |
| ·动物来源和品系 | 第25页 |
| ·主要仪器耗材设备 | 第25-28页 |
| ·细胞分离 | 第28-30页 |
| ·iPS诱导 | 第30-33页 |
| ·iPS细胞多能性鉴定 | 第33-36页 |
| 第三节 实验结果 | 第36-55页 |
| ·间充质细胞和成纤维细胞的分离及多能性相关基因的检测 | 第36-39页 |
| ·无因子诱导iPS细胞系的建立及检测 | 第39-42页 |
| ·单因子iPS细胞系(1F-iPS)的建立及多能性检测 | 第42-43页 |
| ·四因子iPS细胞系的建立及多能性检测 | 第43-46页 |
| ·化学小分子对iPS细胞自我更新和多能性的影响 | 第46-50页 |
| ·iPS细胞中信号通路的研究 | 第50-54页 |
| ·iPS细胞移植和克隆 | 第54-55页 |
| 第四节 讨论 | 第55-57页 |
| 第三章 端粒功能失常与衰老损伤 | 第57-75页 |
| 第一节 导言 | 第57页 |
| 第二节 实验材料和方法 | 第57-65页 |
| ·材料和方法 | 第57-58页 |
| ·细胞的分离及培养 | 第58页 |
| ·端粒定量荧光原位杂交 | 第58-60页 |
| ·中期染色体的制备 | 第58-59页 |
| ·荧光原位杂交 | 第59-60页 |
| ·定量PCR方法检测不同细胞的端粒长度 | 第60页 |
| ·TRF检测端粒长度 | 第60-61页 |
| ·端粒酶检测 | 第61-63页 |
| ·western杂交 | 第63页 |
| ·端粒及损伤基因共定位(IF-FISH) | 第63-64页 |
| ·衰老检测 | 第64-65页 |
| ·qPCR | 第64页 |
| ·细胞衰老β-半乳糖苷酶染色 | 第64-65页 |
| 第三节 实验结果 | 第65-74页 |
| ·不同的细胞在传代的过程中端粒TRF长度逐渐缩短 | 第65-67页 |
| ·Q-FISH检测表明端粒doublets和无信号末端随着传代次数的增加而增加 | 第67-69页 |
| ·实时定量荧光PCR(qPCR)检测端粒长度 | 第69-72页 |
| ·细胞衰老加剧了端粒功能失常 | 第72-74页 |
| 第四节 讨论 | 第74-75页 |
| 第四章 猪中间端粒序列的特点 | 第75-85页 |
| 第一节 导言 | 第75页 |
| 第二节 材料和方法 | 第75-76页 |
| ·仪器和试剂 | 第75页 |
| ·细胞分离和培养 | 第75页 |
| ·核型分析和端粒定量荧光原位杂交(Q-FISH) | 第75页 |
| ·染色单体定向荧光原位杂交(CO-FISH,chro-matid orientation-fluorescence insitu hybridiza-tion) | 第75-76页 |
| ·统计学分析 | 第76页 |
| 第三节 实验结果 | 第76-83页 |
| ·脊椎动物和植物的端粒序列同时存在于猪6号染色体的着丝粒区域 | 第76-78页 |
| ·猪的端粒同时具有植物和动物端粒的特点 | 第78-79页 |
| ·vITSs序列长度的动态变化与TTSs长度的变化趋势相一致 | 第79-82页 |
| ·猪TTSs区端粒doublets及姊妹染色单体交换(telomere sister chromatidexchange,T-SCE)分析 | 第82-83页 |
| 第四节 讨论 | 第83-85页 |
| 第五章 猪iPS细胞中外源基因的沉默与端粒的重编程 | 第85-106页 |
| 第一节 导言 | 第85页 |
| 第二节 材料和方法 | 第85-87页 |
| ·仪器和试剂 | 第85-86页 |
| ·猪iPS细胞系 | 第86页 |
| ·实时定量荧光PCR检测基因表达 | 第86页 |
| ·中性二维(2D)电泳 | 第86-87页 |
| ·数据分析 | 第87页 |
| 第三节 实验结果 | 第87-103页 |
| ·不同猪iPS细胞的多能性 | 第87-89页 |
| ·猪iPS细胞多能性的维持仍然需要外源基因的激活 | 第89-90页 |
| ·不同的猪iPS细胞端粒长度不同 | 第90-93页 |
| ·猪iPS细胞中的端粒酶活性及端粒酶相关基因的表达 | 第93-95页 |
| ·猪iPS的端粒结构特点 | 第95-100页 |
| ·猪iPS细胞中端粒的损伤 | 第100-103页 |
| 第四节 讨论 | 第103-106页 |
| 第六章 结论 | 第106-107页 |
| 参考文献 | 第107-117页 |
| 致谢 | 第117-119页 |
| 附录1 中英文缩略词 | 第119-120页 |
| 个人简历及在学位期间发表的学术论文及成果 | 第120-121页 |
