| 摘要 | 第1-10页 |
| Abstract | 第10-22页 |
| 縮略词 | 第22-23页 |
| 第一章 绪论 | 第23-50页 |
| ·p53研究概述 | 第23-41页 |
| ·野生型p53的结构与功能 | 第23-26页 |
| ·突变p53的研究现状 | 第26-34页 |
| ·p53突变的类型及突变p53的功能 | 第26-27页 |
| ·p53突变的类型及常见形式 | 第26页 |
| ·突变p53的功能缺失(loss of function)、负显性抑制(dominant-negative)与功能获得(gain of function) | 第26-27页 |
| ·突变p53获得癌基因活性的生物学表现 | 第27-30页 |
| ·突变p53与基因组不稳定性 | 第27页 |
| ·突变p53与抗凋亡特性 | 第27-28页 |
| ·突变p53与细胞转移和浸润 | 第28-29页 |
| ·突变p53与TGF-β通路 | 第29页 |
| ·突变p53的其他活性 | 第29-30页 |
| ·突变p53获得癌基因特性的生物学基础 | 第30-34页 |
| ·突变p53的调控因子 | 第30-31页 |
| ·突变p53获得癌基因活性的机制 | 第31-33页 |
| ·突变p53促进肿瘤细胞浸润和转移的机制 | 第33-34页 |
| ·利用小鼠模型研究p53 | 第34-38页 |
| ·运用基因工程小鼠研究p53功能进展 | 第34-36页 |
| ·Trp53基因缺失小鼠模型 | 第36-37页 |
| ·Trp53癌基因错意突变小鼠模型 | 第37-38页 |
| ·p53S的发现及p53S敲入小鼠的研究策略和意义 | 第38-41页 |
| ·p53~(N236S)是在早老综合征MEF细胞产生的ALT肿瘤中发现的p53突变 | 第38-40页 |
| ·研究p53S敲入小鼠的策略和意义 | 第40-41页 |
| ·个性化治疗与普洱茶 | 第41-50页 |
| ·针对p53的个性化治疗 | 第41-43页 |
| ·茶的活性成分 | 第43-44页 |
| ·茶的抗肿瘤作用 | 第44-47页 |
| ·EGCG抗肿瘤作用研究进展 | 第44-46页 |
| ·普洱茶抗肿瘤作用研究进展 | 第46-47页 |
| ·普洱茶的其它活性 | 第47-48页 |
| ·普洱茶抗肿瘤研究的意义及策略 | 第48-50页 |
| 第二章 小鼠体内p53~(N236S)的功能研究 | 第50-82页 |
| ·材料与方法 | 第51-68页 |
| ·p53S小鼠的获得 | 第51-52页 |
| ·cre~*p53S小鼠基因型的测定 | 第52-56页 |
| ·小鼠尾巴的基因组提取 | 第52-53页 |
| ·小鼠基因组p53S基因型的鉴定 | 第53-55页 |
| ·小鼠基因组cre基因型的鉴定 | 第55-56页 |
| ·p53S小鼠的电离辐射及取样 | 第56页 |
| ·实时荧光定量PCR | 第56-58页 |
| ·组织总RNA的提取 | 第56页 |
| ·RNA逆转录 | 第56-57页 |
| ·荧光实时定量PCR | 第57-58页 |
| ·p53S MEF细胞的获取 | 第58-59页 |
| ·细胞的培养 | 第59-60页 |
| ·细胞复苏 | 第59页 |
| ·细胞传代 | 第59页 |
| ·细胞冻存 | 第59页 |
| ·细胞收集 | 第59-60页 |
| ·阿霉素处理MEF细胞 | 第60页 |
| ·Western blot | 第60-64页 |
| ·蛋白样品的预处理和定量 | 第60-61页 |
| ·聚丙烯酰胺胶的制备 | 第61-62页 |
| ·SDS-PAGE | 第62-63页 |
| ·转膜 | 第63页 |
| ·免疫杂交 | 第63-64页 |
| ·显影 | 第64页 |
| ·p53S小鼠的组织取样和保存 | 第64页 |
| ·H&E染色 | 第64-67页 |
| ·石蜡切片 | 第64-66页 |
| ·H&E染色 | 第66-67页 |
| ·划痕实验 | 第67页 |
| ·transwell实验 | 第67-68页 |
| ·实验仪器 | 第68-69页 |
| ·结果与分析 | 第69-78页 |
| ·p53S小鼠生存曲线,肿瘤发生率,肿瘤谱,肿瘤转移性分析 | 第69-74页 |
| ·p53S小鼠生存曲线和肿瘤发生率分析 | 第69-73页 |
| ·p53S小鼠肿瘤谱和肿瘤转移性分析 | 第73-74页 |
| ·小鼠体内p53~(N236S)的功能研究 | 第74-78页 |
| ·p53S丧失了调控细胞周期抑制和细胞凋亡的功能 | 第74-75页 |
| ·p53S杂合子仍然具有野生型p53的功能 | 第75-76页 |
| ·肿瘤中突变p53的累积 | 第76-77页 |
| ·p53S MEF细胞迁移能力增强 | 第77-78页 |
| ·讨论 | 第78-82页 |
| 第三章 普洱茶通过下调突变p53抑制肿瘤细胞的生长 | 第82-102页 |
| ·材料与方法 | 第83-89页 |
| ·细胞系 | 第83-84页 |
| ·结晶紫染色 | 第84页 |
| ·MTT比色法 | 第84-85页 |
| ·细胞周期的检测(PI单染法) | 第85-86页 |
| ·茶,茶组分及MG132处理细胞 | 第86-88页 |
| ·茶处理细胞 | 第86页 |
| ·茶组分处理细胞 | 第86-87页 |
| ·MG132和普洱茶共同处理细胞 | 第87-88页 |
| ·Western blot | 第88页 |
| ·RT-PCR | 第88-89页 |
| ·实验仪器 | 第89-90页 |
| ·结果与分析 | 第90-99页 |
| ·普洱茶对野生型细胞和肿瘤细胞的作用 | 第90-91页 |
| ·普洱茶对几株肿瘤细胞系的生长抑制作用 | 第91-93页 |
| ·肿瘤细胞和野生型细胞对普洱茶的应激反应 | 第93-94页 |
| ·普洱茶作用于肿瘤细胞的分子机理 | 第94-97页 |
| ·普洱茶影响突变p53的泛素化降解过程 | 第97-98页 |
| ·普洱茶中抗肿瘤组分的筛选 | 第98-99页 |
| ·讨论 | 第99-102页 |
| 第四章 总结与展望 | 第102-105页 |
| ·p53S敲入小鼠的功能研究 | 第102页 |
| ·普洱茶通过下调突变p53抑制肿瘤细胞的生长 | 第102-105页 |
| 参考文献 | 第105-118页 |
| 致谢 | 第118-119页 |
| 附录A | 第119-120页 |
