| 符号说明 | 第1-5页 |
| 目录 | 第5-8页 |
| 中文摘要 | 第8-10页 |
| ABSTRACT | 第10-12页 |
| 1 前言 | 第12-33页 |
| ·黄瓜枯萎病研究进展 | 第12-18页 |
| ·黄瓜枯萎病发生现状 | 第12-13页 |
| ·黄瓜枯萎病的危害症状 | 第13页 |
| ·黄瓜枯萎病病原菌 | 第13-14页 |
| ·黄瓜枯萎病侵染源及侵染途径 | 第14-15页 |
| ·黄瓜枯萎病致病机制 | 第15-16页 |
| ·黄瓜枯萎病防治措施 | 第16-18页 |
| ·选育抗病品种 | 第16页 |
| ·农业防治 | 第16-17页 |
| ·化学防治 | 第17-18页 |
| ·生物防治 | 第18页 |
| ·尖孢镰刀菌致病基因研究进展 | 第18-19页 |
| ·磷脂酶 C 研究进展 | 第19-30页 |
| ·磷脂酶的种类 | 第19-20页 |
| ·PLC 的类型及结构 | 第20-22页 |
| ·磷脂酶 C 的活性调节 | 第22-23页 |
| ·真菌磷脂酶 C 的纯化、基因克隆及表达特征 | 第23-24页 |
| ·真菌磷脂酶 C 的信号途径 | 第24-25页 |
| ·真菌 PLC 的功能 | 第25-30页 |
| ·调控病菌的逆境胁迫反应 | 第25-26页 |
| ·参与细胞内信号途径 | 第26页 |
| ·参与营养物质的吸收利用 | 第26-27页 |
| ·参与与细胞生长、形态建成、有丝分裂及细胞壁完整性的维护 | 第27页 |
| ·参与菌丝生长 | 第27-28页 |
| ·参与孢子产生、萌发、附着胞形成及形态建成 | 第28-29页 |
| ·参与调控漆酶的表达 | 第29页 |
| ·参与致病性和毒素合成 | 第29-30页 |
| ·植物病原基因敲除功能研究 | 第30-31页 |
| ·选题的目的意义、研究内容和技术路线 | 第31-33页 |
| ·目的意义 | 第31页 |
| ·研究内容 | 第31-32页 |
| ·技术路线 | 第32-33页 |
| 2 材料和方法 | 第33-53页 |
| ·实验材料 | 第33-36页 |
| ·供试菌株 | 第33页 |
| ·菌株及质粒 | 第33页 |
| ·酶和生化试剂 | 第33页 |
| ·溶液配制 | 第33-34页 |
| ·培养基的配制 | 第34-35页 |
| ·供试植物 | 第35页 |
| ·PCR 引物 | 第35-36页 |
| ·实验方法 | 第36-53页 |
| ·黄瓜枯萎病菌的分离与致病性测定 | 第36-37页 |
| ·黄瓜枯萎病菌 PLC4 基因的克隆和序列分析 | 第37-42页 |
| ·番茄枯萎病菌基因组数据库中 PLCs 基因的结构分析 | 第37页 |
| ·CTAB 法提取黄瓜枯萎病菌基因组总 DNA | 第37-38页 |
| ·PCR 反应体系及程序 | 第38-39页 |
| ·琼脂糖凝胶中 DNA 片段的回收 | 第39页 |
| ·DNA 片段与克隆载体的链接 | 第39页 |
| ·采用改进的 CaCl2法进行大肠杆菌感受态细胞的制备 | 第39-40页 |
| ·大肠杆菌的转化及筛选 | 第40页 |
| ·碱法小量提取质粒 DNA | 第40-41页 |
| ·克隆载体的酶切鉴定 | 第41页 |
| ·DNA 序列的测定 | 第41-42页 |
| ·黄瓜枯萎病菌 PLC4 基因的功能分析 | 第42-53页 |
| ·黄瓜枯萎病菌 PLC4 基因敲除突变体的获得 | 第42-49页 |
| ·黄瓜枯萎病菌 PLC4 基因敲除突变体的互补验证 | 第49-51页 |
| ·黄瓜枯萎病菌 PLC4 基因突变体的表型分析和致病性 | 第51-53页 |
| 3 结果与分析 | 第53-69页 |
| ·黄瓜枯萎病菌的分离与致病性测定 | 第53-55页 |
| ·黄瓜尖孢镰刀菌的分离与鉴定 | 第53-54页 |
| ·尖孢镰刀菌的回接实验 | 第54-55页 |
| ·黄瓜枯萎病菌 PLC4 基因的克隆和序列分析 | 第55-60页 |
| ·番茄枯萎病菌基因组数据库中 PLCs 基因的序列分析 | 第55-56页 |
| ·黄瓜枯萎病菌 PLC4 基因的获得 | 第56-60页 |
| ·黄瓜枯萎病菌基因组 DNA 的提取 | 第56-57页 |
| ·黄瓜枯萎病菌 PLC4 基因的克隆 | 第57页 |
| ·黄瓜枯萎病菌 PLC4 基因测序及序列分析 | 第57-60页 |
| ·黄瓜枯萎病菌 PLC4 基因敲除载体的构建和突变体的获得 | 第60-64页 |
| ·基因敲除载体的构建策略 | 第60-61页 |
| ·黄瓜枯萎病菌 PLC4 基因片段的克隆及酶切 | 第61-62页 |
| ·原生质体的制备和转化 | 第62-63页 |
| ·黄瓜枯萎病菌 PLC4 基因敲除突变体的获得和验证 | 第63-64页 |
| ·黄瓜枯萎病菌△FoPLC4 突变体的互补实验 | 第64-65页 |
| ·互补载体构建 | 第64-65页 |
| ·回复突变体的获得 | 第65页 |
| ·黄瓜枯萎病菌 PLC4 基因回复突变体的验证 | 第65页 |
| ·突变体的表型和致病性分析 | 第65-69页 |
| ·FoPLC4 基因对菌丝生长的影响 | 第65-67页 |
| ·FoPLC4 基因参与分生孢子产生及形态建成 | 第67-68页 |
| ·FoPLC4 基因参与黄瓜枯萎病菌的致病过程 | 第68-69页 |
| 4 讨论 | 第69-72页 |
| 5 总结与展望 | 第72-74页 |
| ·全文总结 | 第72页 |
| ·研究展望 | 第72-74页 |
| 参考文献 | 第74-88页 |
| 致谢 | 第88-89页 |
| 攻读学位期间发表论文情况 | 第89页 |
