| 中文摘要 | 第1-12页 |
| Abstract | 第12-34页 |
| 第一章 前言 | 第34-79页 |
| 第一节 褐藻寡糖的微生物合成 | 第34-50页 |
| ·寡糖产业的发展现状 | 第34-35页 |
| ·褐藻寡糖概述 | 第35-37页 |
| ·褐藻多糖和褐藻寡糖的功能 | 第37-38页 |
| ·褐藻寡糖的生产 | 第38-40页 |
| ·褐藻多糖及褐藻寡糖的代谢途径 | 第40-42页 |
| ·褐藻多糖的合成和分泌 | 第42-43页 |
| ·褐藻寡糖的研究开发前景 | 第43-44页 |
| ·褐藻多糖裂解酶 | 第44-50页 |
| ·褐藻多糖裂解酶的来源 | 第44-45页 |
| ·褐藻多糖裂解酶的底物特异性 | 第45-46页 |
| ·褐藻多糖裂解酶的作用机制 | 第46-47页 |
| ·褐藻多糖裂解酶的序列比较 | 第47-50页 |
| 第二节 聚羟基脂肪酸酯的微生物合成 | 第50-73页 |
| ·PHA 概述 | 第50-51页 |
| ·PHA 的结构与性质 | 第51-53页 |
| ·PHA 发现和发展历史 | 第53-56页 |
| ·PHA 的分类 | 第56-57页 |
| ·PHA 的生物合成途径 | 第57-61页 |
| ·PHA 的生物合成及其代谢途径改造 | 第61-68页 |
| ·短链 PHA 的合成及代谢途径改造 | 第61-64页 |
| ·中长链 PHA 的合成及代谢途径改造 | 第64-66页 |
| ·中长链和短链单体共聚 PHA 的合成及代谢途径改造18 | 第66-68页 |
| ·PHA 合酶的分类 | 第68-70页 |
| ·PHA 合酶的排布 | 第70-73页 |
| 第三节 本研究的主要内容和意义 | 第73-79页 |
| ·本研究的主要内容 | 第73-76页 |
| ·P. mendocina NK-01 合成褐藻寡糖和 PHA_(MCL)的研究 | 第73-74页 |
| ·P. mendocina NK-01 合成褐藻寡糖的代谢途径改造 | 第74页 |
| ·P. mendocina NK-01 的 PHA_(MCL)合成酶 PhaC1、PhaC2的底物特异性研究 | 第74-76页 |
| ·本研究的意义 | 第76-79页 |
| ·利用 P. mendocina NK-01 合成褐藻寡糖的工业生产意义 | 第76-77页 |
| ·P. mendocina NK-01 合成褐藻寡糖高产工程菌的构建的意义 | 第77-78页 |
| ·P. mendocina NK-01 PHA 合成酶 PhaC1 和 PhaC2 底物特异性研究的意义 | 第78-79页 |
| 第二章 利用门多萨假单胞菌 NK-01 同时合成褐藻寡糖和 PHA_(MCL)及其产物结构鉴定 | 第79-115页 |
| 第一节 引言 | 第79-80页 |
| 第二节 实验材料和方法 | 第80-92页 |
| ·实验菌株 | 第80页 |
| ·培养基与缓冲溶液 | 第80-81页 |
| ·主要仪器和设备 | 第81-82页 |
| ·褐藻寡糖和 PHA_(MCL)的发酵生产 | 第82-83页 |
| ·褐藻寡糖的定量 | 第83-84页 |
| ·葡萄糖的测定 | 第84-85页 |
| ·褐藻寡糖单体的结构鉴定 | 第85-87页 |
| ·褐藻多糖 Na 型标准品的制备 | 第85页 |
| ·紫外可见分光光度分析 | 第85页 |
| ·~1H 核磁共振分析 | 第85-86页 |
| ·~(13)C 固体核磁共振分析 | 第86页 |
| ·傅立叶红外光谱测定 | 第86页 |
| ·质谱分析 | 第86页 |
| ·化学反应鉴定褐藻寡糖 | 第86-87页 |
| ·褐藻寡糖的分子量测定 | 第87-88页 |
| ·褐藻寡糖 M/G 比例测定 | 第88-89页 |
| ·衍生反应 | 第88-89页 |
| ·HPLC 测定 | 第89页 |
| ·PHA 结构测定 | 第89-90页 |
| ·核磁共振分析 | 第89-90页 |
| ·傅立叶红外光谱分析 | 第90页 |
| ·气相色谱-质谱联用分析 | 第90页 |
| ·PHA 物理性质的分析 | 第90-92页 |
| ·示差扫描量热分析 | 第91页 |
| ·热失重分析 | 第91页 |
| ·拉伸力学分析 | 第91-92页 |
| ·X-射线衍射分析 | 第92页 |
| 第三节 实验结果与讨论 | 第92-107页 |
| ·酶法测定褐藻寡糖标准曲线的制作 | 第92-94页 |
| ·褐藻寡糖和 PHA_(MCL)在 200 L 发酵罐中的发酵生产 | 第94-95页 |
| ·褐藻寡糖的结构鉴定 | 第95-101页 |
| ·紫外-可见分光光度法 | 第95页 |
| ·~1H 核磁共振分析 | 第95页 |
| ·~(13)C 核磁共振分析 | 第95-97页 |
| ·傅立叶红外光谱分析 | 第97页 |
| ·褐藻寡糖单体质谱鉴定 | 第97-100页 |
| ·褐藻寡糖化学反应鉴定结果 | 第100-101页 |
| ·褐藻寡糖的分子量测定 | 第101页 |
| ·褐藻寡糖 M G 比例的测定 | 第101-102页 |
| ·门多萨假单胞菌 NK-01 生产的 PHA_(MCL)的结构鉴定 | 第102-106页 |
| ·PHA_(MCL)的1H 核磁共振结果 | 第102页 |
| ·PHA1MCL的~(13)C 核磁共振结果 | 第102-104页 |
| ·PHA_(MCL)的 FT-IR 结果 | 第104页 |
| ·PHA_(MCL)的气相色谱-质联用结果 | 第104-106页 |
| ·门多萨假单胞菌 NK-01 生产的 PHA_(MCL)的物性表征 | 第106-107页 |
| 第四节 本章小结与讨论 | 第107-115页 |
| ·本章小结 | 第107-108页 |
| ·讨论 | 第108-115页 |
| 第三章 门多萨假单胞菌 NK-01 合成褐藻寡糖的代谢途径改造 | 第115-150页 |
| 第一节 引言 | 第115页 |
| 第二节 实验材料和方法 | 第115-130页 |
| ·实验菌株和质粒 | 第115-116页 |
| ·实验引物 | 第116-117页 |
| ·培养基与缓冲溶液 | 第117页 |
| ·主要仪器和设备 | 第117-118页 |
| ·工具酶和分子量 Marker | 第118页 |
| ·P. mendocina NK-01 PHA_(MCL)合成操纵子基因敲除打靶载体的构建 | 第118-125页 |
| ·P. mendocina NK-01 基因组的提取 | 第118-119页 |
| ·P. mendocina NK-01 PHA_(MCL)合成操纵子基因的克隆 | 第119-120页 |
| ·PCR 产物的纯化回收 | 第120页 |
| ·TA 克隆 | 第120-121页 |
| ·E. coli JM109、E. coli S17-1 感受态制备和质粒转化 | 第121页 |
| ·重组质粒的提取 | 第121页 |
| ·用 T4 DNA 连接酶进行载体构建连接 | 第121-122页 |
| ·重组质粒的酶切鉴定 | 第122-123页 |
| ·打靶载体 pEX18TcC1ZC2-Amp 的构建 | 第123-125页 |
| ·P. mendocina NK-01 PHA_(MCL)合成操纵子敲除突变体的构建 | 第125页 |
| ·P. mendocina NK-01 基因敲除突变体的验证 | 第125-127页 |
| ·PCR 验证 | 第125页 |
| ·抗性验证 | 第125-127页 |
| ·P. mendocina NK-01 基因敲除突变体与野生菌的发酵对比实验 | 第127-129页 |
| ·摇瓶发酵 | 第127页 |
| ·30 L 发酵罐发酵实验 | 第127-128页 |
| ·褐藻寡糖和 PHA_(MCL)的提取 | 第128页 |
| ·褐藻寡糖的定量 | 第128-129页 |
| ·P. mendocina C7 生产褐藻寡糖酶解产物的质谱分析 | 第129页 |
| ·P. mendocina C7 生产褐藻寡糖分子量测定 | 第129-130页 |
| ·色谱条件 | 第129-130页 |
| ·分子量测定 | 第130页 |
| 第三节 实验结果 | 第130-144页 |
| ·门多萨假单胞菌 NK-01 PHA_(MCL)合酶基因操纵子的克隆 | 第130-131页 |
| ·门多萨假单胞菌 NK-01 PHA_(MCL)合酶基因操纵子敲除打靶载体的构建 | 第131-132页 |
| ·P. mendocina NK-01 PHA_(MCL)合成酶操纵子的敲除 | 第132-136页 |
| ·PCR 验证结果 | 第132-135页 |
| ·抗性验证结果 | 第135-136页 |
| ·门多萨假单胞菌基因敲除突变体的发酵实验 | 第136-138页 |
| ·褐藻寡糖定量标准曲线的制作 | 第136-137页 |
| ·褐藻寡糖和 PHA_(MCL)的发酵实验结果 | 第137-138页 |
| ·P. mendocina C7 合成褐藻寡糖的结构鉴定 | 第138-141页 |
| ·P. mendocina C7 合成褐藻寡糖的分子量测定 | 第141-143页 |
| ·P. mendocina NK-01 褐藻多糖裂解酶的序列比对 | 第143-144页 |
| 第四节 本章小结与讨论 | 第144-150页 |
| ·本章小结 | 第144-145页 |
| ·讨论 | 第145-150页 |
| 第四章 门多萨假单胞菌 NK-01 PHA_(MCL)合成酶 PhaC1 和 PhaC2 底物特异性研究 | 第150-176页 |
| 第一节 引言 | 第150-152页 |
| 第二节 实验材料和方法 | 第152-161页 |
| ·实验菌株 | 第152-153页 |
| ·引物 | 第153页 |
| ·培养基与缓冲溶液 | 第153-155页 |
| ·主要仪器和设备 | 第155页 |
| ·工具酶和分子量 Marker | 第155页 |
| ·phaC1、phaC2 表达载体的构建 | 第155-157页 |
| ·P. mendocina NK-01 基因组的提取 | 第155页 |
| ·phaC1、phaC2 的克隆 | 第155-156页 |
| ·PCR 产物的纯化回收 | 第156页 |
| ·TA 克隆 | 第156页 |
| ·E. coli JM109、E. coli S17-1 感受态制备和质粒转化 | 第156页 |
| ·重组质粒的提取 | 第156页 |
| ·用 T4 DNA 连接酶进行载体构建连接 | 第156页 |
| ·重组质粒的酶切鉴定 | 第156-157页 |
| ·表达载体 pBBR1MCS-C1、pBBR1MCS-C2 的构建 | 第157页 |
| ·表达载体 pBBR1MCS-C1 、 pBBR1MCS-C2 转化 P. mendocina C7 | 第157-158页 |
| ·P. mendocina C7C1 和 P. mendocina C7C2 的摇瓶发酵生产PHA_(MCL) | 第158-159页 |
| ·SDS-PAGE 电泳检测 phaC1 和 phaC2 基因的表达 | 第159-160页 |
| ·待测样品制备 | 第159页 |
| ·制胶、加样及电泳 | 第159-160页 |
| ·傅立叶红外光谱分析 | 第160页 |
| ·气相色谱-质谱联用分析 | 第160页 |
| ·PHA_(MCL)的分子量测定 | 第160-161页 |
| ·色谱条件 | 第160-161页 |
| ·分子量测定 | 第161页 |
| ·PHA_(MCL)的物理性质分析 | 第161页 |
| 第三节 实验结果 | 第161-169页 |
| ·表达载体 pBBR1MCS-C1 和 pBBR1MCS-C2 的构建 | 第161-162页 |
| ·SDS-PAGE 电泳结果 | 第162页 |
| ·三种 PHA_(MCL)的红外光谱比较分析 | 第162-163页 |
| ·PHA_(MCL)在 P. mendocina C7C1、P. mendocina C7C2 中的积累 | 第163-165页 |
| ·PHA_(MCL)合酶的活性控制 PHA_(MCL)的分子量 | 第165-166页 |
| ·三株菌合成 PHA_(MCL)的物性表征 | 第166-169页 |
| ·示差扫描量热分析(DSC) | 第166页 |
| ·热重分析(TGA) | 第166-167页 |
| ·X 射线衍射分析(XRD) | 第167-169页 |
| 第四节 本章小结与讨论 | 第169-176页 |
| ·本章小结 | 第169-171页 |
| ·讨论 | 第171-176页 |
| 第五章 结论与展望 | 第176-184页 |
| 第一节 本论文结论 | 第176-181页 |
| ·利用 P. mendocina NK-01 同时合成褐藻寡糖和 PHA_(MCL) | 第176-178页 |
| ·P. mendocina NK-01 合成褐藻寡糖的代谢途径改造 | 第178-179页 |
| ·PhaC1 和 PhaC2 的底物特异性研究 | 第179-181页 |
| 第二节 展望 | 第181-184页 |
| ·P. mendocina NK-01 合成褐藻寡糖的产量需要进一步提高102 | 第181页 |
| ·P. mendocina NK-01 合成褐藻寡糖的机制需要进一步阐明 | 第181-182页 |
| ·PhaC1 和 PhC2 具有相同底物特异性的原因需要阐明 | 第182-184页 |
| 参考文献 | 第184-224页 |
| 致谢 | 第224-227页 |
| 附录 Ⅰ 论文缩略词一览表 | 第227-229页 |
| 附录 Ⅱ 重要基因的核苷酸序列和编码酶的氨基酸序列 | 第229-234页 |
| 附录 Ⅲ DNA 和蛋白质分子量标准 | 第234-235页 |
| 个人简历及在学期间发表的论文 | 第235-238页 |
