| 中文摘要 | 第1-11页 |
| ABSTRACT | 第11-14页 |
| 1 引言 | 第14-48页 |
| ·奶山羊泌乳规律及候选基因研究 | 第14-18页 |
| ·奶山羊泌乳规律研究 | 第14-15页 |
| ·奶山羊泌乳性状候选基因研究 | 第15-18页 |
| ·microRNA 及其在动物中研究进展 | 第18-38页 |
| ·miRNA 的发现与命名 | 第19-20页 |
| ·miRNA 的生物合成与功能 | 第20-22页 |
| ·miRNA 基本特征与分布 | 第22-25页 |
| ·miRNA 的作用机制与意义 | 第25-29页 |
| ·miRNA 的鉴定方法 | 第29-32页 |
| ·miRNA 靶基因的预测与鉴定 | 第32-37页 |
| ·miRNA 在动物中研究进展 | 第37-38页 |
| ·miRNA 在乳腺发育及泌乳中研究 | 第38-46页 |
| ·乳腺发育与泌乳及激素调节 | 第38-45页 |
| ·microRNA 与乳腺发育及泌乳 | 第45-46页 |
| ·本研究的目的意义 | 第46-48页 |
| 2 材料与方法 | 第48-70页 |
| ·试验材料 | 第48-49页 |
| ·试验动物及样品采集 | 第48页 |
| ·菌株和载体 | 第48页 |
| ·主要数据库及生物分析软件 | 第48-49页 |
| ·试验方法 | 第49-69页 |
| ·cDNA 文库构建 | 第49页 |
| ·Illumina/Solexa 测序数据分析 | 第49-51页 |
| ·miRNA 表达谱 qRT-PCR 验证 | 第51-54页 |
| ·miR-143 及 IGFBP5 乳腺组织表达分析 | 第54-56页 |
| ·奶山羊乳腺上皮细胞分离、纯化及培养 | 第56-58页 |
| ·miR-143 真核表达载体及 IGFBP5 报告基因载体构建 | 第58-66页 |
| ·细胞转染 | 第66页 |
| ·miR143 与 IGFBP5 靶向关系荧光素酶报告基因活性检测 | 第66-67页 |
| ·MTT 法检测 miR-143 对细胞增殖影响 | 第67页 |
| ·荧光 Hoechst33342/PI 双染检测 miR-143 对细胞凋亡影响 | 第67-68页 |
| ·FCM 检测 miR-143 对细胞凋亡影响 | 第68页 |
| ·miR-143 过表达后凋亡相关标志基因检测 | 第68-69页 |
| ·数据统计与分析 | 第69-70页 |
| 3 结果与分析 | 第70-107页 |
| ·崂山奶山羊乳腺组织小 RNA 文库构建及 Solexa 测序 | 第70-76页 |
| ·RNA 质量检测及测序文库构建 | 第70-71页 |
| ·测序数据质量及序列长度分布特征 | 第71-72页 |
| ·文库间公共与特有序列及基因组定位分析 | 第72-75页 |
| ·小 RNA 序列的分类注释 | 第75-76页 |
| ·乳腺组织中已知 miRNAs 的鉴定及功能分析 | 第76-86页 |
| ·已知 miRNA 在不同泌乳时期的分布 | 第76页 |
| ·已知 miRNA 碱基特性分析 | 第76-77页 |
| ·已知 miRNA 差异表达分析 | 第77-81页 |
| ·差异表达 miRNA 靶基因预测 | 第81页 |
| ·差异表达 miRNA 靶基因的 GO 注释 | 第81-82页 |
| ·差异表达 miRNA 靶基因的 KEGG 分析 | 第82-83页 |
| ·差异表达 miRNA 聚类模式 | 第83-85页 |
| ·已知 miRNA 表达 qRT-PCR 验证结果 | 第85-86页 |
| ·乳腺组织中新 miRNA 鉴定及功能分析 | 第86-91页 |
| ·新 miRNA 的鉴定及特征 | 第86-88页 |
| ·新 miRNA 的碱基分布 | 第88-89页 |
| ·新 miRNA 靶基因预测及功能分析 | 第89-91页 |
| ·新 miRNA 的 qRT-PCR 验证 | 第91页 |
| ·miR-143 与 IGFBP5 靶向关系分析 | 第91-102页 |
| ·miR-143 靶基因预测及功能注释 | 第91-92页 |
| ·miR-143 与 IGFBP5 在不同泌乳时期乳腺组织的表达 | 第92-93页 |
| ·miR-143 表达载体及 IGFBP5 报告基因载体构建 | 第93-98页 |
| ·奶山羊乳腺上皮细胞纯化及培养 | 第98-100页 |
| ·miR-143 与 IGFBP5 靶向关系荧光报告基因分析 | 第100-102页 |
| ·miR-143 对乳腺上皮细胞的作用分析 | 第102-107页 |
| ·MTT 法检测细胞增殖活力 | 第102-103页 |
| ·荧光 Hoechst33342/PI 双染检测 miR-143 对细胞凋亡效应 | 第103页 |
| ·FCM 检测 miR-143 对细胞凋亡影响 | 第103-104页 |
| ·FCM 检测 miR-143 对细胞周期影响 | 第104-106页 |
| ·凋亡相关基因表达分析 | 第106-107页 |
| 4 讨论 | 第107-112页 |
| ·Solexa 测序数据质量的可靠性 | 第107-108页 |
| ·miRNA 与其靶基因之间的关系研究 | 第108-110页 |
| ·miR-143 与 IGFBP5 调控机理 | 第110-112页 |
| 5 结论 | 第112-113页 |
| 参考文献 | 第113-128页 |
| 附录 | 第128-134页 |
| 致谢 | 第134-135页 |
| 攻读学位期间发表论文情况 | 第135页 |
