| 摘要 | 第1-6页 |
| ABSTRACT | 第6-12页 |
| 引言 | 第12-14页 |
| 第一部分 CTGF 单链抗体基因片段的扩增 | 第14-34页 |
| 1 前言 | 第14页 |
| 2 材料与设备 | 第14-16页 |
| ·实验动物 | 第14页 |
| ·试剂 | 第14-15页 |
| ·仪器设备 | 第15页 |
| ·主要溶液的配制 | 第15-16页 |
| 3 方法 | 第16-27页 |
| ·小鼠免疫 | 第16页 |
| ·ELISA 检测小鼠血清抗 CTGF 抗体滴度 | 第16-17页 |
| ·小鼠总 RNA 提取 | 第17页 |
| ·反转录小鼠 RNA 至 cDNA | 第17-19页 |
| ·小鼠轻链可变区 VL 与重链可变区 VH 基因片段的扩增及胶回收 | 第19-23页 |
| ·scFv 片段的制备及嵌入载体 | 第23-25页 |
| ·scFv 基因片段的鉴定 | 第25-26页 |
| ·统计学方法 | 第26-27页 |
| 4 结果 | 第27-31页 |
| ·ELISA 检测小鼠血清抗 CTGF 抗体滴度 | 第27页 |
| ·小鼠总 RNA 的提取 | 第27-28页 |
| ·RNA 反转录为 cDNA | 第28页 |
| ·轻链可变区 VL 和重链可变区 VH 基因片段的扩增 | 第28页 |
| ·scFv 的扩增 | 第28-29页 |
| ·scFv 的鉴定 | 第29-31页 |
| 5 讨论 | 第31-34页 |
| 第二部分 噬菌体展示技术筛选抗 CTGF 单链抗体 | 第34-52页 |
| 1 前言 | 第34页 |
| 2.试剂与材料 | 第34-38页 |
| ·主要试剂 | 第34页 |
| ·仪器设备 | 第34-35页 |
| ·主要溶液的配制 | 第35-38页 |
| 3. 方法 | 第38-44页 |
| ·辅助噬菌体 VSCM 13 的扩增及库容量的测定 | 第38-39页 |
| ·抗 CTGF 单链抗体噬菌体展示文库的构建 | 第39-40页 |
| ·抗 CTGF 单链抗体的亲和富集筛选 | 第40-43页 |
| ·抗 CTGF 单链抗体的检测 | 第43-44页 |
| ·统计学方法 | 第44页 |
| 4 结果 | 第44-50页 |
| ·辅助噬菌体 VSCM 13 溶液滴度 | 第44页 |
| ·抗 CTGF 单链抗体库容量 | 第44-45页 |
| ·单链抗体库的富集筛选 | 第45-46页 |
| ·抗 CTGF 单链抗体的检测 | 第46-50页 |
| 5、讨论 | 第50-52页 |
| 第三部分 抗 CTGF 单链抗体抗胰腺癌效应的研究 | 第52-62页 |
| 1 前言 | 第52页 |
| 2 材料及试剂 | 第52-54页 |
| ·细胞系及试剂 | 第52页 |
| ·主要试剂的配制 | 第52-54页 |
| ·主要仪器设备 | 第54页 |
| 3 方法 | 第54-57页 |
| ·细胞培养 | 第54-55页 |
| ·高亲和力噬菌体的扩增及容量的测定 | 第55页 |
| ·Western 检测 PANC-1 中 CTGF 的表达 | 第55-56页 |
| ·MTT 检测抗 CTGF 单链抗体对胰腺癌细胞生长的影响 | 第56-57页 |
| ·FCM 检测抗 CTGF 单链抗体对胰腺癌细胞凋亡的影响 | 第57页 |
| ·统计学方法 | 第57页 |
| 4 结果 | 第57-60页 |
| ·8 号克隆抗体库浓度的测定 | 第57-58页 |
| ·CTGF 在 panc-1 细胞中的表达 | 第58页 |
| ·MTT 检测抗 CTGF 单链抗体对胰腺癌细胞生长的影响 | 第58-59页 |
| ·FCM 检测抗 CTGF 单链抗体对胰腺癌细胞凋亡的影响 | 第59-60页 |
| 5 讨论 | 第60-62页 |
| 结论 | 第62-64页 |
| 参考文献 | 第64-68页 |
| 附录 文献综述 | 第68-76页 |
| 摘要 | 第68页 |
| Abstract | 第68页 |
| 1 胰腺癌的治疗现状 | 第68-69页 |
| 2 CTGF 的来源及其信号通路 | 第69-70页 |
| ·CTGF 的来源及结构 | 第69页 |
| ·CTGF 传导通路 | 第69-70页 |
| 3 CTGF 的生物学作用 | 第70-71页 |
| ·CTGF 在生理状态下的作用 | 第70-71页 |
| ·CTGF 在生物体异常表达时的作用 | 第71页 |
| 4 抗 CTGF 治疗在胰腺癌中的应用进展 | 第71-73页 |
| ·抗 CTGF 抗体在治疗胰腺癌中的作用 | 第71-72页 |
| ·CTGF 的 RNA 干扰在治疗胰腺癌中的应用进展 | 第72-73页 |
| 参考文献 | 第73-76页 |
| 致谢 | 第76-77页 |
