| 摘要 | 第1-10页 |
| Abstract | 第10-12页 |
| 缩略词表 | 第12-13页 |
| 文献综述 | 第13-23页 |
| 1 幽门螺杆菌研究进展 | 第13-17页 |
| ·形态学特征 | 第13页 |
| ·H.pylori感染与宿主免疫反应 | 第13-14页 |
| ·流行病学 | 第14-15页 |
| ·H.pylori感染与胃肠道相关疾病 | 第15-17页 |
| ·H.pylori感染与慢性胃炎 | 第15-16页 |
| ·H.pylori感染与消化性溃疡 | 第16页 |
| ·H.pylori与胃MALT淋巴瘤 | 第16页 |
| ·H.pylori感染与胃癌 | 第16-17页 |
| 2 尿素酶研究进展 | 第17-19页 |
| ·尿素酶的生物学结构 | 第17页 |
| ·尿素酶的致病机制 | 第17-18页 |
| ·对宿主的损伤 | 第18页 |
| ·辅助定植 | 第18页 |
| ·尿素酶相关疫苗的研制 | 第18-19页 |
| 3 伤寒沙门氏菌研究进展 | 第19-20页 |
| ·减毒沙门氏菌载体的优点 | 第19-20页 |
| ·减毒沙门氏菌作为幽门螺杆菌疫苗载体的应用研究 | 第20页 |
| 4 λRed体内重组系统的应用 | 第20-21页 |
| ·λRed体内重组系统的原理 | 第20-21页 |
| ·λRed体内重组系统的组成 | 第21页 |
| 5 细菌表面展示系统的应用 | 第21-23页 |
| 第一章 减毒沙门氏菌CVD908基因缺失突变株的构建 | 第23-35页 |
| 1 材料和方法 | 第23-28页 |
| ·材料 | 第23-25页 |
| ·菌株和质粒(表1-1) | 第23-24页 |
| ·培养基 | 第24页 |
| ·酶与试剂 | 第24页 |
| ·主要仪器 | 第24-25页 |
| ·方法 | 第25-28页 |
| ·引物 | 第25页 |
| ·PCR扩增目的基因方法 | 第25-26页 |
| ·构建打靶载体 | 第26页 |
| ·感受态细胞的制备和电击转化 | 第26-27页 |
| ·敲除asd基因 | 第27页 |
| ·去除卡那霉素抗性基因 | 第27页 |
| ·asd敲除株的RT-PCR分析 | 第27-28页 |
| ·敲除CVD908Δasd的htrA基因 | 第28页 |
| 2 结果 | 第28-33页 |
| ·构建打靶片段两边同源臂 | 第28-30页 |
| ·PCR扩增目的基因两侧同源臂 | 第28-29页 |
| ·鉴定打靶载体 | 第29-30页 |
| ·打靶线性DNA的获得 | 第30页 |
| ·敲除asd基因及PCR鉴定 | 第30页 |
| ·去除卡那霉素抗性基因及验证 | 第30-31页 |
| ·在RNA水平上鉴定asd敲除 | 第31-32页 |
| ·敲除htrA基因以及PCR、RT-PCR鉴定 | 第32页 |
| ·asd基因敲除导致了营养缺陷 | 第32-33页 |
| 3 讨论 | 第33-35页 |
| 第二章 表面展示系统的建立及展示效果评价 | 第35-48页 |
| 1 材料和方法 | 第35-42页 |
| ·材料 | 第35-38页 |
| ·质粒和菌株(表2-1) | 第35-36页 |
| ·酶与试剂 | 第36页 |
| ·培养基 | 第36-37页 |
| ·主要仪器 | 第37页 |
| ·溶液 | 第37-38页 |
| ·方法 | 第38-42页 |
| ·引物 | 第38页 |
| ·PCR扩增目的基因 | 第38-39页 |
| ·感受态细胞的制备 | 第39页 |
| ·电击转化 | 第39页 |
| ·平衡致死及表面展示系统的构建 | 第39-40页 |
| ·重组菌全菌蛋白分析 | 第40页 |
| ·外膜蛋白的提取 | 第40页 |
| ·重组蛋白的免疫印迹分析(Western blot) | 第40-41页 |
| ·重组菌流式细胞计数分析及间接免疫荧光观察 | 第41页 |
| ·通过全菌ELISA的方法检测UreB表达于菌体表面 | 第41-42页 |
| 2 结果 | 第42-46页 |
| ·平衡致死及表面展示系统的构建示意图 | 第42页 |
| ·全菌蛋白分析证明融合蛋白能够表达 | 第42-43页 |
| ·全菌ELISA证明融合蛋白能够展示 | 第43-44页 |
| ·免疫印迹分析证明融合蛋白能够表达 | 第44页 |
| ·荧光显微镜观察证明融合蛋白能够展示 | 第44-45页 |
| ·流式细胞计数分析证明融合蛋白能够展示 | 第45-46页 |
| 3 讨论 | 第46-48页 |
| 第三章 安全性评价及免疫评价 | 第48-55页 |
| 1 材料和方法 | 第48-50页 |
| ·材料 | 第48-49页 |
| ·细菌 | 第48页 |
| ·试剂 | 第48页 |
| ·细胞株及动物 | 第48-49页 |
| ·用到的仪器 | 第49页 |
| ·方法 | 第49-50页 |
| ·减毒株侵染细胞及在胞内增殖力试验 | 第49页 |
| ·减毒株感染小鼠的LD_(50)实验 | 第49-50页 |
| ·动物免疫 | 第50页 |
| ·血清制备 | 第50页 |
| ·抗体测定 | 第50页 |
| 2 结果 | 第50-53页 |
| ·重组减毒株对细胞侵袭力减弱 | 第50-51页 |
| ·重组减毒株在细胞内增殖力降低 | 第51-52页 |
| ·减毒株感染小鼠的LD_(50)明显提高 | 第52页 |
| ·疫苗株在小鼠体内的免疫效果评价 | 第52-53页 |
| 3 讨论 | 第53-55页 |
| 参考文献 | 第55-60页 |
| 致谢 | 第60-62页 |
| 个人简历 | 第62页 |
