| 摘要 | 第1-5页 |
| Abstract | 第5-8页 |
| 目录 | 第8-10页 |
| 第一章 引言 | 第10-13页 |
| 第二章 实验材料 | 第13-19页 |
| ·菌株和质粒 | 第13-14页 |
| ·工具酶、抗体及分子量标准 | 第14-15页 |
| ·主要试剂及试剂盒 | 第15页 |
| ·主要仪器 | 第15-16页 |
| ·主要培养基 | 第16-17页 |
| ·主要溶液 | 第17-19页 |
| 第三章 实验方法 | 第19-56页 |
| ·引物设计 | 第19-20页 |
| ·宿主菌的构建 | 第20-26页 |
| ·宿主菌的选择 | 第20页 |
| ·利用Red重组技术敲除waaL基因 | 第20-26页 |
| ·重组表达载体的构建 | 第26-49页 |
| ·菌毛蛋白PilE表达载体的构建 | 第26-30页 |
| ·寡糖转移酶PglL表达载体的构建 | 第30-32页 |
| ·回补wbbL基因的寡糖转移酶表达载体的构建 | 第32-40页 |
| ·O157多糖基因簇表达载体的构建 | 第40-49页 |
| ·重组表达载体菌株的构建 | 第49-52页 |
| ·CLM24/pMMB66EH-pilE-his/pETtac28-wbbL-pglL重组菌的构建 | 第49-50页 |
| ·CLM24/pMMB66EH-pilE-his/pETtac28-pglL/pACYC184-O157重组菌的构建 | 第50-52页 |
| ·重组表达菌株的培养 | 第52-53页 |
| ·多糖-蛋白结合物的纯化 | 第53-54页 |
| ·纯化多糖-蛋白结合物的Westren印迹鉴定 | 第54-56页 |
| 第四章 实验结果 | 第56-68页 |
| ·宿主菌的成功构建 | 第56页 |
| ·重组表达载体的成功构建 | 第56-65页 |
| ·菌毛蛋白表达载体pMMB66EH-pilE-his的构建 | 第56-57页 |
| ·寡糖转移酶表达载体pETtac28-pglL的构建 | 第57-58页 |
| ·含有寡糖转移酶表达基因和大肠杆菌鼠李糖转移酶基因的表达载体pETtac28-wbbL-pglL的构建 | 第58-61页 |
| ·O157多糖基因簇表达载体O157-pACYC184的构建 | 第61-65页 |
| ·脑膜炎奈瑟球菌O-糖基化修饰系统在大肠杆菌中重构 | 第65-66页 |
| ·O157多糖合成基因簇在大肠杆菌中的表达及其对菌毛蛋白PilE的修饰 | 第66-68页 |
| 第五章 讨论 | 第68-71页 |
| 第六章 结论 | 第71-72页 |
| 附录 | 第72-77页 |
| 1、宿主菌构建原理图 | 第72-73页 |
| 2、以Red同源重组为基础的基因敲除原理图 | 第73页 |
| 3、waaL基因序列 | 第73-74页 |
| 4、ptac-wbbL-rrnB基因序列 | 第74-75页 |
| 5、pilE基因序列 | 第75页 |
| 6、pglL基因序列 | 第75-76页 |
| 7、缩略词表 | 第76-77页 |
| 参考文献 | 第77-82页 |
| 致谢 | 第82页 |
