| 图表索引 | 第1-8页 |
| 英文缩略词 | 第8-9页 |
| 中文摘要 | 第9-12页 |
| ABSTRACT | 第12-15页 |
| 第一章 前言 | 第15-28页 |
| 1 乙型肝炎病毒感染是肝癌的重要诱发因素 | 第15-16页 |
| 2 肝癌血浆标志物对肝癌的诊断和治疗具有重要意义 | 第16-18页 |
| 3 肝癌蛋白质组研究进展 | 第18-25页 |
| ·蛋白质组学采用的主要技术手段 | 第18-19页 |
| ·定量蛋白质组学技术 | 第19-21页 |
| ·HCC蛋白质组学研究的样品 | 第21-24页 |
| ·分泌蛋白质组学为寻找血浆/清蛋白标志提供了新途径 | 第24-25页 |
| 4 本研究的研究目的和研究策略 | 第25-28页 |
| ·HCC分泌释放蛋白质组学研究策略 | 第25-26页 |
| ·PSG9在肿瘤血管生成中的作用 | 第26-28页 |
| 第二章 材料与方法 | 第28-58页 |
| 1 实验材料 | 第28-40页 |
| ·临床样本 | 第28-29页 |
| ·组织培养主要材料与试剂 | 第29-30页 |
| ·蛋白浓缩、定量和SDS-PAGE电泳主要材料与试剂 | 第30页 |
| ·质谱鉴定主要试剂与材料 | 第30-31页 |
| ·ELISA主要试剂与材料 | 第31-32页 |
| ·常用试剂的配制 | 第32-34页 |
| ·主要仪器 | 第34页 |
| ·主要分析软件 | 第34-35页 |
| ·细胞系 | 第35页 |
| ·菌株及质粒载体 | 第35-36页 |
| ·引物序列 | 第36-37页 |
| ·shRNA及shRNA转染试剂 | 第37页 |
| ·抗体 | 第37-38页 |
| ·主要试剂盒 | 第38页 |
| ·其他主要试剂 | 第38-40页 |
| 2 实验方法 | 第40-58页 |
| ·原代器官培养 | 第40页 |
| ·条件培养基的收集 | 第40-41页 |
| ·条件培养基SDS-PAGE电泳分离 | 第41-42页 |
| ·条件培养基蛋白的LC-MS/MS鉴定分析 | 第42-43页 |
| ·数据库搜索 | 第43页 |
| ·条件培养基蛋白全谱的生物信息学分析 | 第43-44页 |
| ·血浆中条件培养基蛋白水平的检测 | 第44-45页 |
| ·统计学分析 | 第45-46页 |
| ·构建PSG9真核表达载体 | 第46-50页 |
| ·细胞生物学方法 | 第50-53页 |
| ·染色质免疫共沉淀(ChIP) | 第53-55页 |
| ·RNA提取、RT-PCR、qRT-PCR | 第55-56页 |
| ·双荧光素酶报告基因实验(Dual-luciferase assay) | 第56-57页 |
| ·Matrigel plug实验分析对血管生成的影响 | 第57-58页 |
| 第三章 实验结果 | 第58-88页 |
| 1 HCC相关分泌/释放蛋白质组学的建立 | 第58-65页 |
| ·原代器官培养条件培养基的蛋白全谱鉴定 | 第58-60页 |
| ·HCC分泌/释放蛋白质组的分子量和等电点分布 | 第60-61页 |
| ·HCC分泌/释放相关蛋白质组的生物学特点 | 第61-65页 |
| 2 候选HCC相关蛋白标志物的验证 | 第65-69页 |
| ·待检测候选蛋白挑选标准 | 第65页 |
| ·血浆中候选蛋白水平的检测 | 第65-69页 |
| 3 血浆候选蛋白标志物检测HCC的受试者工作曲线(ROC曲线) | 第69-71页 |
| ·MMP1作为HCC血浆标志物的诊断效能 | 第69-70页 |
| ·OPN作为HCC血浆标志物的诊断效能 | 第70页 |
| ·PSG9作为血浆标志物诊断HCC病人 | 第70-71页 |
| 4 血浆标志物同HCC临床特征的关系 | 第71-74页 |
| 5 HCC外周血中候选CM蛋白含量同预后的关系 | 第74-78页 |
| ·Kaplan-Meier分析AFP、MMP1、OPN、PSG9对HCC预后影响 | 第74-76页 |
| ·Cox分析影响HCC预后的因素 | 第76-78页 |
| 6 PSG9同肿瘤血管的关系 | 第78-88页 |
| ·PSG9在HCC细胞系中的表达情况 | 第78页 |
| ·HCC组织中PSG9和VEGFA mRNA表达有相关性 | 第78-80页 |
| ·双荧光素酶报告基因实验 | 第80页 |
| ·HCC细胞系中PSG9过表达对VEGFAmRNA的影响 | 第80-81页 |
| ·PSG9过表达在蛋白水平对VEGFA的影响 | 第81-82页 |
| ·下调PSG9表达对VEGFA的影响 | 第82-83页 |
| ·稳定过表达和下调PSG9对SMMC7721细胞增殖的影响 | 第83页 |
| ·人脐带静脉血内皮细胞成血管实验(HUVEC tube forming assay) | 第83-85页 |
| ·Matrigel Plug实验分析PSG9对血管生成影响 | 第85-86页 |
| ·PSG9同VEGFA启动子区结合位点初步研究 | 第86-88页 |
| 第四章 讨论 | 第88-107页 |
| 1 分泌释放蛋白质组诠释HCC微环境特性 | 第89页 |
| 2 分泌释放蛋白质组反映HCC特性 | 第89-90页 |
| 3 CM蛋白中候选蛋白标志物的验证 | 第90-95页 |
| ·癌组织中差异蛋白在血浆中的分布 | 第91-93页 |
| ·癌组织和癌旁组织CM中都包含的血浆蛋白标志物 | 第93-94页 |
| ·癌旁组织CM差异蛋白 | 第94-95页 |
| 4 PSG9在HCC血管生成中的作用 | 第95-107页 |
| ·血管生成的分子机理概述 | 第95-98页 |
| ·VEGF在血管生成中的作用 | 第98-100页 |
| ·以抗血管生成为靶点的肿瘤药物及其作用机理 | 第100-102页 |
| ·肿瘤血管同HCC预后的关系 | 第102页 |
| ·血管生成的实验研究模型 | 第102-105页 |
| ·PSG9是妊娠特异性相关蛋白家族成员 | 第105-107页 |
| 小结(一) | 第107-108页 |
| 小结(二) | 第108-109页 |
| 参考文献 | 第109-117页 |
| 基金资助 | 第117-118页 |
| 致谢 | 第118-119页 |
