| 致谢 | 第1-6页 |
| 摘要 | 第6-8页 |
| ABSTRACT | 第8-15页 |
| 第一章 文献综述 | 第15-41页 |
| ·引言 | 第15页 |
| ·无细胞蛋白合成体系 | 第15-22页 |
| ·无细胞体外合成蛋白质的研究历史 | 第15-16页 |
| ·无细胞体外合成蛋白质的基本原理及优势 | 第16-18页 |
| ·影响无细胞体系蛋白质合成效率的关键因素 | 第18-21页 |
| ·无细胞蛋白合成体系的高通量潜力 | 第21-22页 |
| ·无细胞蛋白合成体系的高通量反应技术 | 第22-31页 |
| ·基于单分PCR反应的体外高通量表达与筛选 | 第22-24页 |
| ·孔板与载波片上的无细胞蛋白合成 | 第24-26页 |
| ·微型反应器中的无细胞蛋白合成 | 第26-28页 |
| ·微囊体系中的无细胞蛋白合成 | 第28-31页 |
| ·DNA凝胶的研究进展及其应用 | 第31-35页 |
| ·DNA凝胶简介 | 第31-32页 |
| ·DNA凝胶的类型以及物理/化学性质 | 第32-34页 |
| ·DNA凝胶的应用 | 第34-35页 |
| ·喷墨打印技术的研究进展及其应用 | 第35-38页 |
| ·喷墨打印技术简介 | 第35-36页 |
| ·喷墨打印技术在生物工程/技术领域的应用 | 第36-38页 |
| ·本工作的基本研究思路与拟研究内容 | 第38-41页 |
| 第二章 实验材料与方法 | 第41-51页 |
| ·实验材料 | 第41页 |
| ·质粒 | 第41页 |
| ·实验菌株 | 第41页 |
| ·重要试剂、工具酶及试剂盒 | 第41页 |
| ·培养基 | 第41页 |
| ·实验仪器 | 第41-42页 |
| ·实验及分析方法 | 第42-51页 |
| ·分子克隆实验 | 第43页 |
| ·DNA分子摩尔浓度测定 | 第43页 |
| ·SDS-PAGE电泳 | 第43页 |
| ·Western-blot分析 | 第43页 |
| ·EGFP荧光强度测定 | 第43页 |
| ·油/水乳液粒度大小分布测定 | 第43-44页 |
| ·木糖测定 | 第44页 |
| ·S12细胞抽提物的制备 | 第44-45页 |
| ·标准无细胞反应液的配置 | 第45-46页 |
| ·商业化无细胞反应液的配置 | 第46页 |
| ·无细胞补充液的配置 | 第46页 |
| ·pIVEX2.4c-eGFP重组质粒的构建 | 第46-48页 |
| ·pET21α-DsRed2重组质粒的构建 | 第48-51页 |
| 第三章 体外高效合成目标蛋白的无细胞体系构建及优化 | 第51-69页 |
| ·引言 | 第51-52页 |
| ·材料和方法 | 第52-60页 |
| ·菌株和载体 | 第52页 |
| ·培养基和培养条件 | 第52-53页 |
| ·工具酶及主要试剂 | 第53页 |
| ·基本的分子生物学操作 | 第53页 |
| ·菌株的活化与分子伴侣质粒的转化 | 第53页 |
| ·菌体浓度的测定 | 第53页 |
| ·重组分子伴侣菌株的表达 | 第53-54页 |
| ·大肠杆菌抽提物的制备 | 第54页 |
| ·含不同信号肽序列的重组质粒的构建 | 第54-55页 |
| ·其它重组质粒模板的构建 | 第55-57页 |
| ·大肠杆菌无细胞体系的构建 | 第57-59页 |
| ·木聚糖酶以及其它几种酶的活性测定 | 第59-60页 |
| ·SDS-PAGE分析 | 第60页 |
| ·Western-blot分析 | 第60页 |
| ·结果与讨论 | 第60-67页 |
| ·信号肽序列对木聚糖酶体外表达的影响 | 第60-62页 |
| ·含有分子伴侣质粒的重组菌的表达 | 第62-63页 |
| ·富含分子伴侣的无细胞体系对木聚糖酶可溶表达的影响 | 第63-65页 |
| ·表面活性剂对体外表达的木聚糖酶活性的影响 | 第65-66页 |
| ·组合表达策略对其它酶体外功能性表达的促进 | 第66-67页 |
| ·小结 | 第67-69页 |
| 第四章 DNA凝胶固定线性模板高效合成木聚糖酶的研究 | 第69-85页 |
| ·引言 | 第69-71页 |
| ·材料和方法 | 第71-77页 |
| ·实验材料 | 第71页 |
| ·X-DNA的合成 | 第71-72页 |
| ·目标质粒的构建 | 第72页 |
| ·线烂目标基因模板的准备 | 第72-73页 |
| ·能够自身环化的PCR模板的准备 | 第73页 |
| ·富含GroEL/S系列分子伴侣的无细胞反应液的配制 | 第73页 |
| ·商业化无细胞反应液的配制 | 第73-74页 |
| ·EP管中DNA凝胶的合成 | 第74页 |
| ·凝胶体系中X-DNA与目标基因模板浓度的优化 | 第74页 |
| ·目标蛋白分子的橙测 | 第74页 |
| ·滤纸片中DNA凝胶的制备 | 第74-75页 |
| ·基于磁力搅拌方式的DNA凝胶微粒的高通量制备 | 第75页 |
| ·DNA凝胶微粒的收集与纯化 | 第75-76页 |
| ·DNA凝胶的染色与检测 | 第76页 |
| ·采用不同xylA模板对无细胞反应效率的影响 | 第76-77页 |
| ·结果和讨论 | 第77-82页 |
| ·X-DNA的合成 | 第77页 |
| ·不同X-DNA粘性末端对合成DNA凝胶的影响 | 第77-78页 |
| ·X-DNA与目标基因模板浓度的优化 | 第78-79页 |
| ·滤纸片中DNA凝胶的制备 | 第79-80页 |
| ·基于磁力搅拌方式制备的DNA凝胶微粒的大小分布 | 第80-81页 |
| ·不同方法制备的DNA凝胶对无细胞合成木聚糖酶效率的促进 | 第81-82页 |
| ·小结 | 第82-85页 |
| 第五章 基于DNA凝胶的无细胞反应器微型化及高通量反应研究 | 第85-99页 |
| ·引言 | 第85-86页 |
| ·材料与方法 | 第86-90页 |
| ·实验材料 | 第86页 |
| ·X-DNA的合成以及目标模板gfp的准备 | 第86页 |
| ·商业化无细胞反应液以及无细胞补充液的配制 | 第86页 |
| ·DNA凝胶反应混合液的配制 | 第86-87页 |
| ·基于冲击混合与膜过滤方式高通量制备DNA凝胶微粒 | 第87-88页 |
| ·不同方式合成DNA凝胶对GFP体外表达的影响 | 第88页 |
| ·不同体积DNA凝胶结合核酸染料标准曲线的绘制 | 第88-89页 |
| ·含有卵磷脂分子以及含有表面活性剂成分的矿物油的准备 | 第89页 |
| ·油相基质中微型生物反应器的高通量制备 | 第89页 |
| ·标准与微型反应模下GFP表达效率的比较 | 第89-90页 |
| ·水相基质中微型生物反应器的高通量制备 | 第90页 |
| ·结果与讨论 | 第90-96页 |
| ·基于冲击混合与膜过滤方式高通量制备DNA凝胶微粒 | 第90-91页 |
| ·不同方式合成的DNA凝胶对GFP表达效率的影响 | 第91-92页 |
| ·不同的物理混合方式对合成DNA凝胶效率的影响 | 第92-93页 |
| ·基于油相体系的无细胞微型生物反应器 | 第93-94页 |
| ·基于水相体系的人工细胞模型的构建 | 第94-96页 |
| ·小结 | 第96-99页 |
| 第六章 基于喷墨打印技术的体外高通量合成蛋白质的研究 | 第99-115页 |
| ·引言 | 第99页 |
| ·材料与方法 | 第99-104页 |
| ·喷墨打印机的改装 | 第99-100页 |
| ·打印样品的准备 | 第100页 |
| ·打印基质的准备 | 第100页 |
| ·抗生素实验菌液悬液的制备 | 第100页 |
| ·琼脂玻璃双碟的准备 | 第100-101页 |
| ·特定菌落图案的打印 | 第101页 |
| ·高密度细胞阵列的打印 | 第101页 |
| ·基于喷墨打印技术的抗生素效价测定 | 第101-102页 |
| ·基于喷墨打印技术的抗生素最低抑菌浓度测定 | 第102-103页 |
| ·无细胞蛋白合成体系的打印 | 第103-104页 |
| ·结果与讨论 | 第104-113页 |
| ·热喷墨打印后大肠杆菌存活率分析 | 第104-105页 |
| ·细胞菌落形态 | 第105页 |
| ·高密度细胞阵列 | 第105-106页 |
| ·抗生素效价测定 | 第106-107页 |
| ·基于喷墨打印技术的梯度抑菌模型 | 第107-109页 |
| ·无细胞反应液打印条件优化 | 第109-110页 |
| ·无细胞蛋白合成体系的打印 | 第110-113页 |
| ·小结 | 第113-115页 |
| 第七章 结论与展望 | 第115-119页 |
| ·结论 | 第115-117页 |
| ·展望 | 第117-119页 |
| 参考文献 | 第119-131页 |
| 作者简历 | 第131页 |
| 攻读博士学位期间主要科研成 | 第131页 |
