| 摘要 | 第1-8页 |
| ABSTRACT | 第8-11页 |
| 目录 | 第11-15页 |
| 图表清单 | 第15-18页 |
| 縮略词 | 第18-22页 |
| 1 文献综述 | 第22-48页 |
| ·家蚕、杆状病毒与食品 | 第22-25页 |
| ·家蚕与食品的关系 | 第22页 |
| ·杀虫剂与食品安全 | 第22-23页 |
| ·杆状病毒杀虫剂与食品安全 | 第23-24页 |
| ·重组杆状病毒杀虫剂 | 第24-25页 |
| ·杆状病毒概况 | 第25-31页 |
| ·杆状病毒分类及生活周期 | 第25-26页 |
| ·杆状病毒与宿主的相互作用 | 第26-29页 |
| ·杆状病毒宿主范围 | 第29-30页 |
| ·杆状病毒的应用 | 第30-31页 |
| ·家蚕核刑多角体病毒 | 第31-46页 |
| ·家蚕核型多角体病毒简介 | 第31页 |
| ·家蚕核型多角体病毒的多样性 | 第31-32页 |
| ·AcMNPV与BmNPV的基因组比较 | 第32页 |
| ·BmNPV基因的研究进展 | 第32-46页 |
| ·本研究的目的和意义 | 第46-48页 |
| ·主要研究内容 | 第47页 |
| ·研究的技术路线 | 第47-48页 |
| 2 Bm65基因生物信息学分析 | 第48-52页 |
| ·分析软件及方法 | 第48页 |
| ·结果 | 第48-50页 |
| ·Bm65的核苷酸及氨基酸的序列特征 | 第48-50页 |
| ·讨论 | 第50-51页 |
| ·小结 | 第51-52页 |
| 3 Bm65的原核表达、真核表达及多克隆抗体制备 | 第52-67页 |
| ·材料 | 第52-55页 |
| ·菌种、载体、实验动物 | 第52-54页 |
| ·酶和化学试剂 | 第54页 |
| ·培养基 | 第54页 |
| ·缓冲液 | 第54-55页 |
| ·实验方法 | 第55-58页 |
| ·引物设计及PCR | 第55-56页 |
| ·CaCl_2法制备大肠杆菌感受态细胞 | 第56页 |
| ·目的蛋白的诱导表达 | 第56-57页 |
| ·目的蛋白的割胶纯化 | 第57页 |
| ·抗血清的制备 | 第57页 |
| ·SDS-PAGE及免疫印迹分析 | 第57页 |
| ·pAc~(Bm65-egfp)的构建 | 第57-58页 |
| ·细胞转染 | 第58页 |
| ·转染上清感染sf9细胞 | 第58页 |
| ·结果与分析 | 第58-64页 |
| ·Bm65的克隆 | 第58-59页 |
| ·Bm65基因的原核表达及检测 | 第59-60页 |
| ·融合蛋白的鉴定 | 第60页 |
| ·Bm65蛋白多克隆抗体的制备及检测 | 第60-61页 |
| ·Bm65真核表达基因的克隆 | 第61页 |
| ·HTB-ie1-egfp-Bm65z-SV40的构建及鉴定 | 第61-62页 |
| ·pAc~(Bm65-egfp) bacmid的构建及鉴定 | 第62-63页 |
| ·pAc~(Bm65-egfp)转染sf9细胞 | 第63-64页 |
| ·免疫印迹检测Bm65的表达情况 | 第64页 |
| ·讨论 | 第64-66页 |
| ·小结 | 第66-67页 |
| 4 Bm65在BmN细胞中的转录分析和蛋白定位 | 第67-74页 |
| ·材料 | 第67-68页 |
| ·病毒、细胞和试剂 | 第67页 |
| ·引物 | 第67-68页 |
| ·实验方法 | 第68-69页 |
| ·总RNA的提取 | 第68页 |
| ·RT-PCR | 第68页 |
| ·5’-RACE分析 | 第68页 |
| ·免疫荧光观察 | 第68-69页 |
| ·结果 | 第69-71页 |
| ·Bm65的转录分析 | 第69-70页 |
| ·Bm65的表达时相 | 第70页 |
| ·Bm65的亚细胞定位 | 第70-71页 |
| ·讨论 | 第71-73页 |
| ·小结 | 第73-74页 |
| 5 Bm65缺失型病毒的构建及功能分析 | 第74-90页 |
| ·材料 | 第74-76页 |
| ·质粒、菌株、试剂 | 第74-75页 |
| ·引物 | 第75-76页 |
| ·抗生素配制 | 第76页 |
| ·方法 | 第76-81页 |
| ·Bm65基因打靶线性化片段的制备 | 第76-77页 |
| ·电转化感受态DH10Bac细胞制备 | 第77-78页 |
| ·电击转化同源重组 | 第78页 |
| ·含有pBm~(Bm65KO)的菌株中pBAD-gbaA质粒的去除 | 第78页 |
| ·供体质粒pFB1-polh-gfp-Bm65的构建 | 第78-79页 |
| ·pBm~(WT-GP)、pBm~(Bm65KO-GP)和pBm~(Bm65Rep-GP)的构建 | 第79页 |
| ·细胞转染 | 第79页 |
| ·转染上清感染BmN细胞 | 第79-80页 |
| ·病毒滴度测定 | 第80页 |
| ·qPCR分析Bm65缺失后对病毒DNA复制的影响 | 第80-81页 |
| ·结果 | 第81-87页 |
| ·Bm65基因打靶线性化片断的鉴定 | 第81页 |
| ·重组质粒pUC18-Bm65US-Cm-Bm65DS的酶切鉴定 | 第81-82页 |
| ·Bm65缺失型病毒的构建及鉴定 | 第82-83页 |
| ·pFB1-polh-gfp-Bm65的构建及鉴定 | 第83-84页 |
| ·pBm~(WT-GP)、pBm~(Bm65KO-GP)和pBm~(Bm65Rep-GP)的构建及鉴定 | 第84-85页 |
| ·pBm~(WT-GP)、pBm~(Bm65KO-GP)和pBm~(Bm65Rep-GP)在BmN细胞上的复制分析 | 第85-86页 |
| ·病毒DNA复制分析 | 第86-87页 |
| ·讨论 | 第87-88页 |
| ·小结 | 第88-90页 |
| 6 Bm91基因生物信息学分析 | 第90-94页 |
| ·分析软件及方法 | 第90页 |
| ·结果 | 第90-92页 |
| ·Bm91的核苷酸和其编码的氨基酸的序列特征 | 第90-92页 |
| ·讨论 | 第92-93页 |
| ·小结 | 第93-94页 |
| 7 Bm91的多克隆抗体制备、转录分析及蛋白定位 | 第94-106页 |
| ·材料 | 第94页 |
| ·方法 | 第94-96页 |
| ·BV的纯化 | 第94-95页 |
| ·多角体的纯化 | 第95页 |
| ·ODV的纯化 | 第95-96页 |
| ·BV/ODV囊膜蛋白的分离纯化 | 第96页 |
| ·BV/ODV核衣壳的分离纯化 | 第96页 |
| ·N-糖基化抑制实验 | 第96页 |
| ·结果 | 第96-104页 |
| ·Bm91的克隆 | 第96-97页 |
| ·Bm91基因的原核表达及检测 | 第97-98页 |
| ·融合蛋白的鉴定 | 第98页 |
| ·Bm91蛋白的多克隆抗体制备及抗体的检测 | 第98-99页 |
| ·Bm91的转录分析 | 第99-100页 |
| ·Bm91的表达时相 | 第100-101页 |
| ·Bm91的亚细胞定位 | 第101页 |
| ·Bm91蛋白在病毒结构中的定位 | 第101-103页 |
| ·N-糖基化抑制实验 | 第103-104页 |
| ·讨论 | 第104-105页 |
| ·小结 | 第105-106页 |
| 8 Bm91缺失型病毒的构建及功能分析 | 第106-117页 |
| ·材料 | 第106页 |
| ·方法 | 第106-108页 |
| ·重组质粒pUC18-Bm91US-Cm-Bm91DS的构建 | 第106-107页 |
| ·重组病毒半数致死剂量(50% lethal dose,LD_(50))的测定 | 第107页 |
| ·重组病毒半数致死时间(50% lethal time,LT_(50))的测定 | 第107-108页 |
| ·结果 | 第108-114页 |
| ·Bm91基因打靶线性化片段的PCR扩增 | 第108页 |
| ·重组质粒pUC18-Bm91US-Cm-Bm91DS的酶切鉴定 | 第108-109页 |
| ·Bm91缺失型病毒的构建及鉴定 | 第109-110页 |
| ·pFB1-polh-gfp-Bm91的构建及鉴定 | 第110-111页 |
| ·pBm~(WT-GP)、pBm~(Bm91KO-GP)和pBm~(Bm91Rep-GP)的构建及鉴定 | 第111-112页 |
| ·pBm~(WT-GP)、pBm~(Bm91KO-GP)和pBm~(Bm91Rep-GP)在RmN细胞上的复制 | 第112-113页 |
| ·Bm91缺失病毒的生物学分析 | 第113-114页 |
| ·讨论 | 第114-115页 |
| ·小结 | 第115-117页 |
| 9 总结和展望 | 第117-118页 |
| ·总结 | 第117页 |
| ·展望 | 第117-118页 |
| ·Bm65的进一步分析 | 第117页 |
| ·Bm91的进一步分析 | 第117-118页 |
| 本研究创新点 | 第118-119页 |
| 参考文献 | 第119-139页 |
| 致谢 | 第139-140页 |
| 博士期间发表的研究论文和参加的课题 | 第140-141页 |
| 发表的研究论文 | 第140页 |
| 导师指导下主持课题 | 第140-141页 |
| 参与课题 | 第141页 |
