| 摘要 | 第1-6页 |
| Abstract | 第6-8页 |
| 缩略词 | 第8-12页 |
| 第一部分 文献综述 | 第12-25页 |
| ·限制性核酸内切酶的研究概况 | 第12-16页 |
| ·限制性内切酶的定义 | 第12页 |
| ·限制性内切酶的发现及来源 | 第12-13页 |
| ·限制性内切酶的分类及性质 | 第13-16页 |
| ·限制性内切酶的应用 | 第16页 |
| ·限制性核酸内切酶Dpn Ⅰ的概述 | 第16-18页 |
| ·限制性核酸内切酶(Dpn Ⅰ)的来源 | 第16页 |
| ·限制性核酸内切酶Dpn Ⅰ的物化性质 | 第16-17页 |
| ·限制性核酸内切酶(Dpn Ⅰ)的反应温度 | 第17页 |
| ·限制性核酸内切酶(Dpn Ⅰ)的单位定义 | 第17页 |
| ·限制性核酸内切酶(Dpn Ⅰ)的用途 | 第17页 |
| ·限制性核酸内切酶(Dpn Ⅰ)限制酶Dpn Ⅰ切割原理 | 第17页 |
| ·限制性核酸内切酶(DpnⅠ)的甲基化敏感性 | 第17页 |
| ·限制性核酸内切酶(DpnⅠ)限制酶的主要应用 | 第17-18页 |
| ·Sso7d蛋白简要概述 | 第18-19页 |
| ·Sso7d蛋白的来源 | 第18页 |
| ·Sso7d蛋白的耐热机制 | 第18-19页 |
| ·毕赤酵母表达系统研究概况 | 第19-23页 |
| ·毕赤酵母表达宿主 | 第19-20页 |
| ·毕赤酵母表达载体 | 第20-21页 |
| ·启动子 | 第21页 |
| ·信号肽 | 第21页 |
| ·选择性标记 | 第21页 |
| ·毕赤酵母外源蛋白的表达 | 第21页 |
| ·外源蛋白的翻译后修饰 | 第21-22页 |
| ·毕赤酵母表达外源蛋白的特点 | 第22-23页 |
| ·在毕赤酵母菌中高效表达外源基因的策略 | 第23页 |
| ·本文研究目的 | 第23-25页 |
| 第二部分 材料与方法 | 第25-40页 |
| ·材料 | 第25-30页 |
| ·菌株和质粒 | 第25-26页 |
| ·培养基 | 第26-27页 |
| ·试剂和酶 | 第27-28页 |
| ·仪器和设备 | 第28页 |
| ·实验主要涉及的溶液 | 第28-30页 |
| ·引物 | 第30页 |
| ·方法 | 第30-40页 |
| ·PCR扩增目的基因 | 第30-31页 |
| ·琼脂糖凝胶回收目的DNA片段 | 第31页 |
| ·PCR产物的T4 DNA聚合酶处理 | 第31-32页 |
| ·质粒DNA的抽提及纯化 | 第32-33页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞的制备 | 第33页 |
| ·大肠杆菌的转化 | 第33页 |
| ·毕赤酵母感受态细胞制备 | 第33-34页 |
| ·毕赤酵母的转化 | 第34页 |
| ·毕赤酵母表达菌直接PCR鉴定重组子 | 第34页 |
| ·外源基因在毕赤酵母中的摇瓶诱导表达 | 第34-35页 |
| ·SDS-PAGE检测表达蛋白 | 第35-36页 |
| ·目的蛋白的质谱验证 | 第36-37页 |
| ·蛋白质浓度测定 | 第37页 |
| ·肝素琼脂糖亲和层析法分离纯化限制性核酸内切酶Dpn Ⅰ步骤 | 第37-38页 |
| ·Dpn Ⅰ酶学性质分析 | 第38页 |
| ·糖基化分析 | 第38-39页 |
| ·去糖基化分析 | 第39-40页 |
| 第三部分 结果与分析 | 第40-53页 |
| ·重组限制性内切酶基因Dpn Ⅰ,SSO-Dpn Ⅰ基因获得 | 第40-41页 |
| ·Dpn Ⅰ,SSO-Dpn Ⅰ毕赤酵母表达载体的构建 | 第41-47页 |
| ·毕赤酵母重组表达载体的构建 | 第41-45页 |
| ·pHBM-Dpn Ⅰ,pHBM-SSO-Dpn Ⅰ的毕赤酵母转化及转化子的鉴定 | 第45-47页 |
| ·Dpn Ⅰ,SSO-Dpn Ⅰ在毕赤酵母中的表达及SDS-PAGE分析 | 第47-48页 |
| ·重组限制性内切酶Dpn Ⅰ,SSO-Dpn Ⅰ的蛋白质浓度测定 | 第48-49页 |
| ·Dpn Ⅰ在毕赤酵母中的表达蛋白糖基化及去糖基化SDS-PAGE分析 | 第49-50页 |
| ·肝素纯化限制性内切酶Dpn Ⅰ | 第50-51页 |
| ·限制性内切酶Dpn Ⅰ最适PH值 | 第51页 |
| ·限制性内切酶Dpn Ⅰ最适反应温度和耐高温温度分析 | 第51页 |
| ·重组限制性内切酶Dpn Ⅰ的蛋白质酶切酶切和连接效率测定 | 第51-52页 |
| ·酶切效果对比分析 | 第52-53页 |
| 第四部分 讨论与展望 | 第53-55页 |
| ·讨论 | 第53页 |
| ·展望 | 第53-55页 |
| 参考文献 | 第55-60页 |
| 致谢 | 第60页 |
