| 摘要 | 第1-4页 |
| ABSTRACT | 第4-8页 |
| 前言 | 第8-9页 |
| 第一章 文献综述 | 第9-19页 |
| ·D-（对羟基）苯甘氨酸的合成 | 第9-13页 |
| ·全化学合成法 | 第9-11页 |
| ·半化学合成法 | 第11-12页 |
| ·全生物合成 | 第12-13页 |
| ·D-对羟基苯甘氨酸转移酶研究进展 | 第13-18页 |
| ·对羟基苯甘氨酸转移酶简介 | 第13-15页 |
| ·D-HpgT 的工业应用研究 | 第15-16页 |
| ·转氨酶改造研究进展 | 第16-18页 |
| ·本文的研究意义与研究内容 | 第18-19页 |
| ·研究意义 | 第18页 |
| ·研究内容 | 第18-19页 |
| 第二章 hpgt 基因的序列优化与真核表达 | 第19-38页 |
| ·材料 | 第19-23页 |
| ·菌种和质粒 | 第19-20页 |
| ·主要试剂与仪器 | 第20-23页 |
| ·实验方法 | 第23-28页 |
| ·hpgt 的密码子优化及全基因合成 | 第23页 |
| ·质粒提取 | 第23-24页 |
| ·hpgt 基因的克隆 | 第24页 |
| ·目的基因回收 | 第24-25页 |
| ·重组表达载体 pPIC9K-hpgt 的构建 | 第25-26页 |
| ·重组质粒的鉴定 | 第26页 |
| ·毕赤酵母工程菌 GS115/pPIC9K-hpgt 的构建 | 第26-27页 |
| ·毕赤酵母菌落 PCR 鉴定 | 第27页 |
| ·HpgT 蛋白在毕赤酵母中的分泌表达 | 第27-28页 |
| ·蛋白凝胶电泳 SDS-PAGE | 第28页 |
| ·重组蛋白酶 HpgT 的酶活测定 | 第28页 |
| ·结果与讨论 | 第28-37页 |
| ·hpgt 的密码子优化及全基因合成 | 第28-31页 |
| ·重组表达载体 pPIC9K-hpgt 的鉴定 | 第31-33页 |
| ·毕赤酵母工程菌 GS115/pPIC9K-hpgt 的鉴定 | 第33-35页 |
| ·阳性重组子分泌表达产物的检测 | 第35页 |
| ·重组蛋白 HpgT 酶活测定结果 | 第35-37页 |
| ·本章小结 | 第37-38页 |
| 第三章 HpgT 的原核表达与酶热力学、动力学分析 | 第38-54页 |
| ·材料 | 第38-40页 |
| ·菌种和质粒 | 第38页 |
| ·主要试剂和仪器 | 第38-40页 |
| ·方法 | 第40-45页 |
| ·hpgt 的密码子优化及全基因合成 | 第40页 |
| ·质粒提取 | 第40-41页 |
| ·hpgt 基因的克隆 | 第41页 |
| ·目的基因回收 | 第41页 |
| ·重组表达载体 pCDF-hpgt 的构建 | 第41-42页 |
| ·重组质粒的鉴定 | 第42-43页 |
| ·重组菌的诱导表达及诱导条件优化 | 第43页 |
| ·重组蛋白 His-HpgT 的纯化及定量 | 第43页 |
| ·蛋白凝胶电泳 SDS-PAGE | 第43-44页 |
| ·重组蛋白 HpgT 酶活测定的 HPLC 条件 | 第44页 |
| ·重组蛋白酶 HpgT 的酶活测定 | 第44页 |
| ·HpgT 酶活反应动力学分析 | 第44-45页 |
| ·HpgT 酶活反应最适温度和 pH 的测定 | 第45页 |
| ·结果与讨论 | 第45-52页 |
| ·重组表达载体的鉴定 | 第45-46页 |
| ·重组菌的诱导表达及条件优化 | 第46-48页 |
| ·重组蛋白的纯化及定量 | 第48-49页 |
| ·重组蛋白酶 HpgT 的酶活测定 | 第49页 |
| ·重组蛋白酶 HpgT 酶动力学分析 | 第49-51页 |
| ·HpgT 酶活反应的最适温度和 pH 值 | 第51-52页 |
| ·本章小结 | 第52-54页 |
| 第四章 对羟基苯甘氨酸转氨酶 HpgT 的结构分析与突变 | 第54-66页 |
| ·材料 | 第54-56页 |
| ·菌种和质粒 | 第54页 |
| ·主要试剂和仪器 | 第54-56页 |
| ·方法 | 第56-58页 |
| ·D-对羟基苯甘氨酸转氨酶 HpgT 的结构分析 | 第56页 |
| ·易错 PCR | 第56-57页 |
| ·突变基因操作与蛋白诱导表达 | 第57页 |
| ·突变酶活性筛选 | 第57-58页 |
| ·结果与讨论 | 第58-65页 |
| ·HpgT 蛋白的结构分析 | 第58-59页 |
| ·易错 PCR 体系构建与突变效果 | 第59页 |
| ·突变结果与分析 | 第59-65页 |
| ·本章小结 | 第65-66页 |
| 第五章 结论与展望 | 第66-68页 |
| ·结论 | 第66-67页 |
| ·展望 | 第67-68页 |
| 参考文献 | 第68-72页 |
| 发表论文和参加科研情况说明 | 第72-73页 |
| 致谢 | 第73页 |
