| 摘要 | 第1-9页 |
| Abstract | 第9-11页 |
| 1 引言 | 第11-19页 |
| ·硒与硒蛋白 | 第11-12页 |
| ·硒蛋白 | 第12-15页 |
| ·硒蛋白的合成与调控 | 第12-14页 |
| ·硒蛋白合成相关因子 | 第14-15页 |
| ·SelW | 第15-18页 |
| ·SelW的组织分布 | 第15-16页 |
| ·硒对SelW的调控 | 第16-17页 |
| ·SelW的氧化还原功能 | 第17-18页 |
| ·试验的目的与意义 | 第18-19页 |
| 2 材料与方法 | 第19-29页 |
| ·实验材料 | 第19-21页 |
| ·仪器设备 | 第19页 |
| ·菌种、载体与细胞系 | 第19-20页 |
| ·实验试剂 | 第20页 |
| ·主要试剂的配制 | 第20-21页 |
| ·实验方法 | 第21-29页 |
| ·鸡SelW基因的克隆和真核表达载体的构建 | 第21-23页 |
| ·绿色荧光蛋白表达载体构建 | 第23-24页 |
| ·细胞转染前准备 | 第24-25页 |
| ·鸡SelW基因细胞转染和细胞处理 | 第25页 |
| ·鸡SelW基因细胞转染后处理 | 第25页 |
| ·过氧化氢诱导细胞凋亡的TUNEL检测法 | 第25-26页 |
| ·过氧化氢诱导细胞凋亡的AO/EB双染检测法 | 第26页 |
| ·鸡SelW基因的RT-PCR检测 | 第26-27页 |
| ·实时定量PCR法检测细胞SelW、SecS、SPS-1基因以及凋亡基因Caspase-3、Caspase-8和Fas mRNA表达的检测 | 第27-28页 |
| ·试验数据的统计及分析 | 第28-29页 |
| 3 结果与分析 | 第29-45页 |
| ·鸡SelW基因真核表达载体构建 | 第29-31页 |
| ·鸡SelW cDNA基因克隆 | 第29页 |
| ·鸡SelW序列测序鉴定及分析 | 第29-30页 |
| ·鸡SelW cDNA真核表达载体构建 | 第30-31页 |
| ·绿色荧光蛋白表达载体构建 | 第31-33页 |
| ·CHO-K1细胞增值生长曲线 | 第33页 |
| ·CHO-K1过氧化氢LD_(50)的测定和形态学观察 | 第33-34页 |
| ·细胞转染条件的优化 | 第34-35页 |
| ·过氧化氢诱导细胞凋亡的TUNEL法检测结果 | 第35-38页 |
| ·过氧化氢诱导细胞凋亡的AO/EB双染检测结果 | 第38-39页 |
| ·SelW、SecS、SPS-1、Caspase-3、Caspase-8和Fas基因实时定量PCR检测方法的建立 | 第39-40页 |
| ·细胞转染鸡SelW基因后SelW的RT-PCR检测结果 | 第40-42页 |
| ·细胞转染鸡SelW基因后SelW、SecS、SPS-1基因mRNA表达的检测 | 第42-44页 |
| ·细胞转染鸡SelW基因后SelW mRNA表达的检测结果 | 第42页 |
| ·细胞转染鸡SelW基因后SecS mRNA表达的检测结果 | 第42-43页 |
| ·细胞转染鸡SelW基因后SPS-1 mRNA表达的检测结果 | 第43-44页 |
| ·细胞转染鸡SelW基因后凋亡基因Caspase-3、Caspase-8和Fas mRNA表达的检测结果 | 第44-45页 |
| 4 讨论 | 第45-50页 |
| ·鸡SelW真核表达载体的构建和细胞系的选择 | 第45-46页 |
| ·细胞转染条件的优化 | 第46-47页 |
| ·细胞转染后SelW、SecS和SPS-1基因的表达量变化 | 第47页 |
| ·鸡SelW的抗氧化分析 | 第47-50页 |
| 5 结论 | 第50-51页 |
| 致谢 | 第51-52页 |
| 参考文献 | 第52-63页 |
| 附图 | 第63-66页 |
| 攻读硕士学位期间发表的论文 | 第66页 |
