| 摘要 | 第1-10页 |
| ABSTRACT | 第10-12页 |
| 缩略语表 | 第12-14页 |
| 1 文献综述 | 第14-29页 |
| ·肉鸡胫骨软骨发育不良 | 第14-18页 |
| ·正常胫骨软骨发育的特征 | 第14-16页 |
| ·胫骨软骨发育不良的特征 | 第16-17页 |
| ·胫骨软骨发育不良的原因 | 第17-18页 |
| ·胫骨软骨发育不良研究现状 | 第18页 |
| ·细胞周期蛋白Cyclin家族 | 第18-23页 |
| ·细胞周期蛋白的发现 | 第19-20页 |
| ·细胞周期蛋白的种类 | 第20-22页 |
| ·细胞周期蛋白的作用机制 | 第22-23页 |
| ·细胞周期蛋白对MPF活性的调节 | 第22页 |
| ·细胞周期蛋白的降解 | 第22页 |
| ·细胞周期蛋白成为现代医学的研究热点 | 第22-23页 |
| ·细胞周期蛋白Ⅰ(Cyclin Ⅰ) | 第23页 |
| ·Matrilin蛋白家族 | 第23-29页 |
| ·软骨基质 | 第23-25页 |
| ·Matrilin蛋白 | 第25页 |
| ·关于Matrilin 3 | 第25-29页 |
| 2 研究目的及意义 | 第29-30页 |
| 3 材料与设备 | 第30-36页 |
| ·实验动物 | 第30页 |
| ·质粒和菌种 | 第30页 |
| ·主要生物学试剂 | 第30-32页 |
| ·分子克隆相关试剂 | 第30-31页 |
| ·原位杂交相关试剂 | 第31-32页 |
| ·免疫组化相关试剂 | 第32页 |
| ·主要溶液及试剂配制 | 第32-35页 |
| ·抗生素类 | 第32页 |
| ·细菌培养基 | 第32页 |
| ·质粒抽提相关溶液 | 第32-33页 |
| ·组织固定包埋使用试剂 | 第33页 |
| ·免疫组化相关溶液配制 | 第33页 |
| ·原位杂交相关溶液配制 | 第33-35页 |
| ·实验器材及仪器 | 第35-36页 |
| 4 方法与步骤 | 第36-52页 |
| ·动物实验 | 第36页 |
| ·动物模型建立 | 第36页 |
| ·组织的取样和保存 | 第36页 |
| ·组织包埋 | 第36页 |
| ·克隆载体的构建 | 第36-41页 |
| ·总RNA的提取 | 第37页 |
| ·引物设计 | 第37-38页 |
| ·RT-PCR反应体系 | 第38页 |
| ·PCR产物的回收与纯化 | 第38-39页 |
| ·感受态细胞的制备 | 第39页 |
| ·目的片段与载体的连接 | 第39页 |
| ·质粒的制备(小量制备,碱裂解法) | 第39-40页 |
| ·质粒的转化 | 第40页 |
| ·重组质粒的鉴定 | 第40-41页 |
| ·重组质粒的酶切鉴定 | 第40页 |
| ·重组质粒PCR鉴定 | 第40-41页 |
| ·重组质粒测序 | 第41页 |
| ·原位杂交 | 第41-48页 |
| ·玻片的预处理 | 第41页 |
| ·软骨组织切片的制备 | 第41-42页 |
| ·探针的制备 | 第42-46页 |
| ·Cyclin Ⅰ和Matrilin3基因的探针引物设计和PCR扩增 | 第42页 |
| ·质粒DNA的提取 | 第42-44页 |
| ·质粒的线性化 | 第44页 |
| ·DIG标记cRNA探针的合成 | 第44-45页 |
| ·cRNA探针浓度检测 | 第45-46页 |
| ·原位杂交 | 第46-48页 |
| ·杂交前处理 | 第46-47页 |
| ·杂交 | 第47页 |
| ·杂交后处理 | 第47-48页 |
| ·显色及观察 | 第48页 |
| ·免疫组化 | 第48-52页 |
| ·玻片的预处理 | 第48-49页 |
| ·组织固定及包埋 | 第49页 |
| ·切片制备 | 第49页 |
| ·脱蜡 | 第49页 |
| ·抗原修复 | 第49-50页 |
| ·5%BSA封闭 | 第50页 |
| ·一抗孵育 | 第50页 |
| ·二抗孵育 | 第50页 |
| ·加SABC | 第50页 |
| ·显色 | 第50页 |
| ·复染 | 第50页 |
| ·脱水 | 第50-51页 |
| ·封片 | 第51-52页 |
| 5 结果与分析 | 第52-67页 |
| ·总RNA提取及Cyclin Ⅰ、Matrilin3基因的RT-PCR扩增 | 第52-53页 |
| ·重组克隆质粒鉴定 | 第53-55页 |
| ·质粒线性化 | 第55-57页 |
| ·探针合成及效率检测 | 第57页 |
| ·CyclinⅠ原位杂交染色结果 | 第57-60页 |
| ·Matrilin3原位杂交染色结果 | 第60-63页 |
| ·Matrilin3免疫组化染色结果 | 第63-67页 |
| 6 讨论 | 第67-70页 |
| ·肉鸡胫骨软骨RNA的提取与Cyclin Ⅰ、Matrilin3基因的扩增 | 第67页 |
| ·CyclinⅠ、Matrilin3基因的克隆 | 第67页 |
| ·CyclinⅠ的原位杂交 | 第67-68页 |
| ·Matrilin3的原位杂交 | 第68页 |
| ·Matrilin3的免疫组化 | 第68-70页 |
| 总结 | 第70-71页 |
| 参考文献 | 第71-77页 |
| 致谢 | 第77页 |
