| 摘要 | 第1-6页 |
| Abstract | 第6-11页 |
| 第一章 文献综述 | 第11-20页 |
| 1 隐孢子虫病的研究概况 | 第11-13页 |
| ·隐孢子虫病的危害性 | 第11页 |
| ·隐孢子虫生活史 | 第11-12页 |
| ·隐孢子虫病的预防和治疗 | 第12-13页 |
| 2 microRNA及其研究进展 | 第13-20页 |
| ·miRNA的发现 | 第13-14页 |
| ·新miRNA的判断标准 | 第14页 |
| ·miRNA的结构特征和特点 | 第14页 |
| ·miRNA的合成和作用机制 | 第14-15页 |
| ·miRNA的分析方法 | 第15页 |
| ·miRNA的检测方法 | 第15-18页 |
| ·miRNA的应用 | 第18-19页 |
| ·存在的问题及研究展望 | 第19-20页 |
| 第二章 微小隐孢子虫miR-2980、miR-m0001在不同种型隐孢子虫卵囊中的表达水平 | 第20-31页 |
| 1 材料与方法 | 第20-21页 |
| ·材料 | 第20-21页 |
| 2 方法 | 第21-25页 |
| ·隐孢子虫卵囊的收集 | 第21-22页 |
| ·隐孢子虫卵囊的纯化 | 第22页 |
| ·隐孢子虫卵囊总RNA的提取 | 第22-23页 |
| ·分离和富集小RNA | 第23页 |
| ·加poly(A)尾 | 第23-24页 |
| ·反转录合成cDNA | 第24页 |
| ·cp-miR-2980、cp-miR-m0001表达水平的检测 | 第24-25页 |
| ·琼脂糖凝胶电泳 | 第25页 |
| 3 结果 | 第25-28页 |
| ·小RNA的分离和鉴定 | 第25页 |
| ·Real-time PCR检测结果 | 第25-28页 |
| 4 讨论 | 第28-31页 |
| 第三章 微小隐孢子虫miR-2980、miR-m0001的真核表达质粒的构建和初步鉴定 | 第31-51页 |
| 1 材料和方法 | 第31-32页 |
| ·材料 | 第31-32页 |
| 2 方法 | 第32-42页 |
| ·微小隐孢子虫microRNA的生物信息学分析 | 第32页 |
| ·微小隐孢子虫基因组DNA的提取 | 第32-33页 |
| ·cp-miR-2980前体、cp-miR-m0001前体引物的设计和合成 | 第33页 |
| ·PCR扩增目的序列 | 第33-34页 |
| ·琼脂糖凝胶电泳 | 第34页 |
| ·pMD-pre-cp-miR-2980、pMD-pre-cp-miR-m0001质粒的构建 | 第34-37页 |
| ·pVAX1-cp-miR-2980、pVAX1-cp-miR-m0001真核重组表达质粒的构建 | 第37-39页 |
| ·重组质粒pVAX1-cp-miR-2980、pVAX1-cp-miR-m0001和pVAX1质粒的纯化和去除内毒素处理 | 第39-40页 |
| ·转染HCT-8细胞 | 第40-41页 |
| ·重组质粒在HCT-8细胞中的表达检测和分析 | 第41-42页 |
| 3 结果 | 第42-49页 |
| ·微小隐孢子虫microRNA二级结构的分析和预测 | 第42-43页 |
| ·对牛微小隐孢子虫microRNA的分析和预测 | 第43-44页 |
| ·cp-miR-2980前体、cp-miR-m0001前体片段的扩增 | 第44-45页 |
| ·重组质粒pMD-pre-cp-miR-2980和pMD-pre-cp-miR-m0001的酶切 | 第45-46页 |
| ·重组质粒pVAX-cp-miR-2980和pVAX-cp-miR-m0001的酶切 | 第46页 |
| ·重组质粒pVAX-cp-miR-2980和pVAX-cp-miR-m0001的序列测定结果 | 第46-47页 |
| ·HCT-8细胞总RNA提取 | 第47-48页 |
| ·RT-PCR检测结果 | 第48-49页 |
| 4 讨论 | 第49-51页 |
| 第四章 微小隐孢子虫miR-m0001靶基因的初步验证 | 第51-60页 |
| 1 材料和方法 | 第51-52页 |
| ·材料 | 第51-52页 |
| 2 方法 | 第52-56页 |
| ·微小隐孢子虫基因组DNA的提取 | 第52页 |
| ·靶基因T引物的设计和合成 | 第52页 |
| ·PCR扩增目的序列 | 第52页 |
| ·琼脂糖凝胶电泳 | 第52-53页 |
| ·扩增目的片段与pMD18-T载体的连接 | 第53页 |
| ·pGL3 -T真核重组表达质粒的构建 | 第53-54页 |
| ·重组质粒pGL3-T、pGL3和pRL-SV40质粒的纯化和去除内毒素处理 | 第54页 |
| ·转染HCT-8细胞 | 第54-55页 |
| ·双荧光素酶活性检测 | 第55-56页 |
| 3 结果 | 第56-58页 |
| ·靶基因的扩增 | 第56页 |
| ·重组质粒pMD-T的酶切鉴定 | 第56-57页 |
| ·重组质粒pGL3-T的酶切鉴定 | 第57页 |
| ·双荧光素酶报告基因检测与分析 | 第57-58页 |
| 4 讨论 | 第58-60页 |
| 全文结论与创新 | 第60-61页 |
| 1 全文结论 | 第60页 |
| 2 创新点 | 第60-61页 |
| 参考文献 | 第61-67页 |
| 附录Ⅰ | 第67-68页 |
| 附录Ⅱ | 第68-70页 |
| 致谢 | 第70-71页 |
| 个人简介 | 第71页 |
