中文摘要 | 第1-8页 |
英文摘要 | 第8-10页 |
第一部分 文献综述 | 第10-49页 |
微生物脂肪酶研究进展 | 第10-49页 |
1 微生物脂肪酶的水解特异性 | 第11-13页 |
2 微生物脂肪酶的纯化 | 第13-14页 |
3 微生物脂肪酶基因的克隆及序列分析 | 第14-17页 |
4 微生物脂肪酶基因表达与调控 | 第17-24页 |
5 微生物脂肪酶的蛋白质一级结构 | 第24-30页 |
6 微生物脂肪酶的分泌和折叠 | 第30-32页 |
7 微生物脂肪酶的空间结构及酶作用机理 | 第32-39页 |
8 微生物脂肪酶的研究展望 | 第39-49页 |
第二部分 前言 | 第49-51页 |
第三部分 材料与方法 | 第51-64页 |
1 材料 | 第51-53页 |
2 一般方法 | 第53-59页 |
3 具体方法 | 第59-64页 |
第四部分 结果与分析 | 第64-105页 |
1 扩展青霉PF898碱性脂肪酶的纯化及N-端氨基酸序列分析 | 第64-73页 |
1.1 扩展青霉PF898碱性脂肪酶(PEL)的纯化 | 第64-70页 |
1.2 纯化蛋白的分子量 | 第70页 |
1.3 N-端氨基酸序列分析 | 第70-73页 |
2 扩展青霉PF898碱性脂肪酶cDNA克隆及序列分析 | 第73-89页 |
2.1 菌丝体总RNA的提取 | 第73页 |
2.2 RT-PCR | 第73-74页 |
2.3 5'RACE | 第74-76页 |
2.4 PEL的cDNA及氨基酸序列分析 | 第76-86页 |
2.5 PEL高级结构计算机模建 | 第86-89页 |
3 扩展青霉PF898碱性脂肪酶GENOMIC DNA序列分析 | 第89-95页 |
3.1 菌丝体DNA的抽提 | 第89-90页 |
3.2 PCR扩增 | 第90页 |
3.3 PEL的DNA序列分析 | 第90-95页 |
4 扩展青霉PF898碱性脂肪酶基因在大肠杆菌中的表达 | 第95-100页 |
4.1 重组表达质粒的构建 | 第95-96页 |
4.2 在大肠杆菌中的诱导表达 | 第96-99页 |
4.3 表达产物的活性检测 | 第99-100页 |
5 扩展青霉PF898碱性脂肪酶基因在毕赤酵母中的表达 | 第100-105页 |
5.1 重组表达质粒的构建 | 第100-101页 |
5.2 阳性克隆的筛选及诱导表达 | 第101-102页 |
5.3 表达蛋白的活性检测 | 第102-105页 |
第五部分 讨论与结论 | 第105-110页 |
1 讨论 | 第105-108页 |
2 结论 | 第108-110页 |
参考文献 | 第110-120页 |
附录一 GENBANK收录的扩展青霉PF898碱性脂肪酶cDNA序列 | 第120-122页 |
附录二 GENBANK收录的扩展青霉PF898碱性脂肪酶基因组DNA序列 | 第122-125页 |
附录三 在学期间发表和完成的论文 | 第125-127页 |
致谢 | 第127-128页 |