| 中文摘要 | 第1-10页 |
| 1 引言与文献综述 | 第10-35页 |
| 1．1 国内外马铃薯生产概况 | 第10-12页 |
| 1．1．1 世界马铃薯生产概况 | 第10页 |
| 1．1．2 中国马铃薯栽培历史和现状 | 第10-12页 |
| 1．1．3 马铃薯加工业发展概况 | 第12页 |
| 1．2 马铃薯品种选育现状 | 第12-16页 |
| 1．2．1 马铃薯育种目标 | 第12-13页 |
| 1．2．2 马铃薯育种方法 | 第13-16页 |
| 1．3 马铃薯块茎贮藏方法及低温储藏糖化现象 | 第16-17页 |
| 1．4 马铃薯块茎低温糖化代谢机制 | 第17-21页 |
| 1．4．1 马铃薯块茎低温糖化的生化机制 | 第17-18页 |
| 1．4．2 UGP的研究和应用 | 第18-20页 |
| 1．4．2．1 UGP的功能 | 第18-19页 |
| 1．4．2．2 UGP的定位 | 第19页 |
| 1．4．2．3 UGP的酶学 | 第19-20页 |
| 1．4．2．4 UGP的分子生物学 | 第20页 |
| 1．4．2．5 UGP在马铃薯冷糖化研究中的利用 | 第20页 |
| 1．4．3 AcInv的研究和应用 | 第20-21页 |
| 1．4．3．1 AcInv的功能 | 第20页 |
| 1．4．3．2 转化酶的定位 | 第20-21页 |
| 1．4．3．3 AcInv的酶学 | 第21页 |
| 1．4．3．4 AcInv的分子生物学 | 第21页 |
| 1．4．3．5 AcInv的研究和应用 | 第21页 |
| 1．5 反义RNA技术 | 第21-27页 |
| 1．5．1 反义RNA的发现 | 第21-22页 |
| 1．5．2 反义RNA的作用机理 | 第22-23页 |
| 1．5．3 反义RNA技术在植物基因工程中的应用 | 第23-25页 |
| 1．5．4 反义RNA技术的方法改良 | 第25-26页 |
| 1．5．5 酶性RNA技术 | 第26-27页 |
| 1．6 植物遗传转化技术及在马铃薯基因工程中的应用 | 第27-34页 |
| 1．6．1 植物遗传转化技术 | 第27-28页 |
| 1．6．2 农杆菌介导的植物遗传转化 | 第28-33页 |
| 1．6．2．1 农杆菌的Ti质粒和Ri质粒 | 第28-29页 |
| 1．6．2．2 农杆菌转化植物细胞的机理 | 第29-32页 |
| 1．6．2．3 农杆菌介导的基因转移方法 | 第32-33页 |
| 1．6．2．4 农杆菌介导的基因转移方法的不足之处 | 第33页 |
| 1．6．3 农杆菌介导遗传转化技术在马铃薯基因工程中的应用 | 第33-34页 |
| 1．7 本研究的目的和意义 | 第34页 |
| 1．8 项目研究技术路线 | 第34-35页 |
| 2 AcInv基因克隆与测序 | 第35-50页 |
| 2．1 材料与试剂 | 第35页 |
| 2．1．1 材料 | 第35页 |
| 2．1．2 菌种及质粒 | 第35页 |
| 2．1．3 试剂 | 第35页 |
| 2．2 方法 | 第35-43页 |
| 2．2．1 马铃薯块茎总RNA的提取 | 第35-36页 |
| 2．2．2 PCR引物的设计和合成 | 第36-37页 |
| 2．2．3 AcInv基因PCR扩增 | 第37页 |
| 2．2．4 目的片段的回收和克隆 | 第37-43页 |
| 2．2．4．1 目的片段的回收 | 第37-38页 |
| 2．2．4．2 重组体的构建及向宿主细胞的导入 | 第38-39页 |
| 2．2．4．3 重组体的筛选与鉴定 | 第39-41页 |
| 2．2．4．4 重组体DNA测序 | 第41-43页 |
| 2．3 结果与分析 | 第43-46页 |
| 2．3．1 马铃薯块茎中的AcInv基因的诱导转录和总RNA的提取 | 第43页 |
| 2．3．2 cDNA中目的片段的PCR扩增 | 第43-44页 |
| 2．3．3 克隆、阳性重组子的筛选 | 第44-45页 |
| 2．3．4 核苷酸序列分析 | 第45-46页 |
| 2．4 讨论 | 第46-50页 |
| 2．4．1 关于马铃薯块茎RNA提取方法和取材 | 第46-49页 |
| 2．4．2 关于PCR引物设计中加入酶切位点 | 第49-50页 |
| 3 AcInv反义基因植物表达载体构建和转化农杆菌 | 第50-58页 |
| 3．1 材料和试剂 | 第50页 |
| 3．1．1 载体 | 第50页 |
| 3．1．2 菌株 | 第50页 |
| 3．1．3 试剂 | 第50页 |
| 3．2 方法 | 第50-53页 |
| 3．2．1 植物表达载体构建 | 第50-51页 |
| 3．2．1．1 质粒的提取方法 | 第50页 |
| 3．2．1．2 pBI121质粒和pGEMA质粒酶切和目的片段的回收 | 第50-51页 |
| 3．2．1．3 线状载体分子与目的基因DNA分子的连接 | 第51页 |
| 3．2．1．4 植物表达载体的酶切鉴定 | 第51页 |
| 3．2．2 表达载体转化农杆菌 | 第51-53页 |
| 3．2．2．1 感受态农杆菌制备 | 第51页 |
| 3．2．2．2 表达载体转化农杆菌 | 第51-52页 |
| 3．2．2．3 农杆菌整合外源基因的PCR鉴定 | 第52-53页 |
| 3．3 结果与分析 | 第53-56页 |
| 3．3．1 关于反义基因表达载体构建 | 第53-55页 |
| 3．3．2 重组子pBIRA导入农杆菌 | 第55-56页 |
| 3．3．3 农杆菌工程菌的鉴定 | 第56页 |
| 3．4 讨论 | 第56-58页 |
| 3．4．1 关于反义基因表达载体构建 | 第56页 |
| 3．4．2 关于转化农杆菌及其鉴定 | 第56-57页 |
| 3．4．3 关于反义基因表达载体构建的启动子选择 | 第57-58页 |
| 4 AcInv反义基因转化马铃薯体系研究 | 第58-71页 |
| 4．1 材料和方法 | 第58-63页 |
| 4．1．1 转化材料 | 第58页 |
| 4．1．2 试剂 | 第58页 |
| 4．1．3 研究方法 | 第58-63页 |
| 4．1．3．1 转化受体和培养基筛选方法 | 第58-59页 |
| 4．1．3．2 外值体培养方法 | 第59-60页 |
| 4．1．3．3 受体材料的Kan敏感性试验 | 第60页 |
| 4．1．3．4 农杆菌工程菌菌液的准备 | 第60页 |
| 4．1．3．5 农杆菌工程菌转化马铃薯的方法 | 第60页 |
| 4．1．3．6 转化植株的分子检测 | 第60-63页 |
| 4．2 结果分析 | 第63-69页 |
| 4．2．1 马铃薯再生培养系统优化 | 第63-65页 |
| 4．2．2 受体材料Kan敏感性鉴定 | 第65-66页 |
| 4．2．3 转化系统的优化 | 第66-68页 |
| 4．2．3．1 预培养时间对转化的影响 | 第66页 |
| 4．2．3．2 农杆菌浓度对转化的影响 | 第66页 |
| 4．2．3．3 浸染时间对转化的影响 | 第66页 |
| 4．2．3．4 共培养对转化的影响 | 第66-67页 |
| 4．2．3．5 诱导剂处理效果和使用方法的改进 | 第67页 |
| 4．2．3．6 转化受体褐化的防止方法 | 第67页 |
| 4．2．3．7 硝酸银对转化受体愈伤诱导和分化的效果 | 第67-68页 |
| 4．2．4 农杆菌的转化结果 | 第68-69页 |
| 4．2．4．1 受体材料的转化效果 | 第68页 |
| 4．2．4．2 对不同品种的转化效果 | 第68-69页 |
| 4．2．4．3 转化苗分子检测结果 | 第69页 |
| 4．3 讨论 | 第69-71页 |
| 4．3．1 马铃薯基因转化受体系统的建立 | 第69-70页 |
| 4．3．2 外植体的褐化抑制 | 第70页 |
| 4．3．3 关于诱导根芽分化 | 第70页 |
| 4．3．4 遗传转化基因型依赖性问题 | 第70-71页 |
| 5 结论 | 第71-72页 |
| 参考文献 | 第72-80页 |
| 英文摘要 | 第80-81页 |
