Ⅰ型鸭肝炎病毒A66弱毒株全基因组分析及逆转录套式PCR方法的建立
| 摘要 | 第1-5页 |
| Abstract | 第5-11页 |
| 文献综述 | 第11-18页 |
| 1 引言 | 第18-19页 |
| 2 材料与方法 | 第19-29页 |
| ·材料 | 第19-20页 |
| ·参考毒(菌)株 | 第19页 |
| ·主要试剂 | 第19页 |
| ·溶液配制 | 第19-20页 |
| ·主要仪器 | 第20页 |
| ·Ⅰ型鸭肝炎病毒A66弱毒株全基因组分析 | 第20-26页 |
| ·病毒及RNA的提取 | 第20页 |
| ·引物设计 | 第20-21页 |
| ·反转录 | 第21页 |
| ·反转录cDNA的PCR | 第21-22页 |
| ·RT-PCR产物的琼脂糖电泳分析 | 第22页 |
| ·RT-PCR产物的回收与纯化 | 第22页 |
| ·PCR产物的克隆 | 第22-26页 |
| ·PCR产物的连接 | 第23页 |
| ·E.coli DH5α感受态细胞的制备 | 第23页 |
| ·转化E.coli DH5α感受态细胞 | 第23页 |
| ·重组质粒的提取及鉴定 | 第23-24页 |
| ·重组质粒的PCR鉴定 | 第24页 |
| ·基因序列测定 | 第24页 |
| ·基因序列分析 | 第24-26页 |
| ·Ⅰ型鸭肝炎病毒逆转录套式PCR检测方法的建立 | 第26-29页 |
| ·引物的设计与合成 | 第26页 |
| ·病料处理 | 第26页 |
| ·RNA病毒核酸的提取 | 第26-27页 |
| ·DNA病毒核酸的提取 | 第27页 |
| ·细菌基因组DNA的抽提 | 第27页 |
| ·RT-PCR方法的建立 | 第27-29页 |
| ·逆转录 | 第27页 |
| ·第一次PCR扩增 | 第27-28页 |
| ·套式PCR | 第28页 |
| ·套式PCR方法的特异性测定 | 第28页 |
| ·套式PCR方法的敏感性测定 | 第28-29页 |
| ·临床病料的检测 | 第29页 |
| 3 结果与分析 | 第29-39页 |
| ·全基因组RT-PCR扩增结果 | 第29页 |
| ·重组质粒的鉴定 | 第29-30页 |
| ·A66株全长cDNA基因组核苷酸序列测定结果 | 第30-31页 |
| ·核苷酸序列比较及其推导的氨基酸序列分析 | 第31-33页 |
| ·系统进化树 | 第33-36页 |
| ·套式RT-PCR的特异性 | 第36页 |
| ·套式RT-PCR的敏感性 | 第36-37页 |
| ·临床病料的检测 | 第37-39页 |
| 4 讨论 | 第39-42页 |
| ·Ⅰ型DHV的危害性 | 第39页 |
| ·Ⅰ型DHV基因组全长cDNA的克隆 | 第39页 |
| ·关于VP1基因的变异性及系统进化树 | 第39-40页 |
| ·Ⅰ型DHV的快速诊断方法 | 第40-42页 |
| 结论 | 第42-43页 |
| 参考文献 | 第43-47页 |
| 致谢 | 第47-48页 |
| 作者简介 | 第48页 |
| 在读期间发表论文 | 第48页 |
