| 摘要 | 第1-9页 |
| ABSTRACT | 第9-11页 |
| 英文缩略表 | 第11-12页 |
| 第一章 文献综述 | 第12-29页 |
| 1.植物花发育相关基因的研究进展 | 第12-17页 |
| ·植物成花机理 | 第12-16页 |
| ·成花诱导过程(Induction process) | 第12-13页 |
| ·花序分生组织的形成 | 第13-14页 |
| ·花分生组织的形成 | 第14-15页 |
| ·花器官原基的形成 | 第15-16页 |
| ·棉花花发育相关基因研究 | 第16-17页 |
| 2.基因文库 | 第17-22页 |
| ·基因组文库和cDNA文库 | 第17-18页 |
| ·构建cDNA文库的方法 | 第18-21页 |
| ·cDNA文库的构建 | 第18页 |
| ·均一化cDNA文库的构建 | 第18-19页 |
| ·复性式均一化技术 | 第19-20页 |
| ·Carninci法 | 第20页 |
| ·DSN法 | 第20页 |
| ·与基因组饱和杂交的方法 | 第20-21页 |
| ·棉花cDNA文库的构建和应用 | 第21-22页 |
| ·cDNA文库的缺点 | 第22页 |
| 3 EST技术及其应用 | 第22-27页 |
| ·EST及其研究概况 | 第22-23页 |
| ·EST技术的原理和方法 | 第23-24页 |
| ·EST的应用 | 第24-27页 |
| ·构建遗传学图谱 | 第24-25页 |
| ·分离与鉴定新基因 | 第25页 |
| ·基因差异表达的研究 | 第25-26页 |
| ·比较基因组学研究 | 第26页 |
| ·用于制备DNA芯片 | 第26-27页 |
| ·棉花EST | 第27页 |
| 4.本研究的目的意义 | 第27-29页 |
| 第二章 中棉所36花发育期均一化CDNA文库的构建 | 第29-56页 |
| 1 实验材料与试剂 | 第29-30页 |
| ·实验材料 | 第29-30页 |
| ·化学试剂、酶及试剂盒 | 第30页 |
| 2 实验方法 | 第30-45页 |
| ·总RNA的提取 | 第30-31页 |
| ·mRNA的分离纯化 | 第31-32页 |
| ·cDNA的合成 | 第32-33页 |
| ·合成cDNA第一链 | 第32-33页 |
| ·cDNA扩增(Long-distancePCR,LD-PCR) | 第33页 |
| ·cDNA的均一化 | 第33-37页 |
| ·特异降解双链DNA酶(DSN)的稀释 | 第33页 |
| ·DSN活性检测 | 第33-34页 |
| ·准备用于均一化的双链cDNA | 第34页 |
| ·杂交 | 第34-35页 |
| ·DSN处理 | 第35-36页 |
| ·对DSN处理的样品进行第1次PCR扩增 | 第36-37页 |
| ·对DSN处理的样品进行第2次PCR扩增 | 第37页 |
| ·蛋白酶处理 | 第37-38页 |
| ·sfi Ⅰ酶处理 | 第38页 |
| ·用Chroma SPIN—400将cDNA按分子大小分级分部 | 第38-39页 |
| ·处理后dscDNA与载体pDNR-LIB连接 | 第39-40页 |
| ·连接产物转化(以下操作均在无菌环境下进行) | 第40页 |
| ·均一化文库滴度检测 | 第40-41页 |
| ·均一化文库插入片断长度检测 | 第41页 |
| ·cDNA均一化效果分析 | 第41-45页 |
| ·虚拟Northern blot(Virtual Northern blot) | 第41-45页 |
| 3 实验结果与分析 | 第45-52页 |
| ·总RNA的提取 | 第45-46页 |
| ·mRNA的分离 | 第46-47页 |
| ·mRNA反转录成全长cDNA | 第47页 |
| ·均一化 | 第47-49页 |
| ·全长cDNA的均一化 | 第47-48页 |
| ·均一化cDNA的第二次扩增 | 第48-49页 |
| ·用Chroma SPIN—400将cDNA按分子大小分级分部 | 第49页 |
| ·克隆数目和重组率的鉴定 | 第49-50页 |
| ·插入片断长度的检测 | 第50-51页 |
| ·均一化cDNA文库的均一化效果分析 | 第51-52页 |
| 4 讨论 | 第52-56页 |
| ·取样 | 第52页 |
| ·棉花总RNA的提取 | 第52-53页 |
| ·mRNA的纯化及反转录 | 第53页 |
| ·均一化全长cDNA文库 | 第53-54页 |
| ·DSN法与其它均一化方法的比较 | 第54-56页 |
| 第三章 中棉所36花发育期表达序列标签(EST)分析 | 第56-63页 |
| 1 分析材料 | 第56页 |
| 2 生物信息学分析 | 第56-57页 |
| ·序列拼接 | 第56页 |
| ·基因注释及功能分类 | 第56-57页 |
| 3 结果与分析 | 第57-62页 |
| ·有效EST序列的获得 | 第57-58页 |
| ·EST序列拼接分析 | 第58-59页 |
| ·基因表达频率与均一化分析 | 第59页 |
| ·基因注释及功能分类 | 第59-62页 |
| 4 讨论 | 第62-63页 |
| ·Blastn与Blastx比对结果的差异 | 第62页 |
| ·ESTs与数据库同源性比较 | 第62-63页 |
| 第四章 展望 | 第63-64页 |
| 参考文献 | 第64-71页 |
| 附录 | 第71-72页 |
| 致谢 | 第72页 |
