| 摘要 | 第1-11页 |
| ABSTRACT | 第11-15页 |
| 第一章 文献综述 | 第15-26页 |
| 1 引言 | 第15页 |
| 2 组蛋白密码假说 | 第15页 |
| 3 组蛋白甲基转移酶和组蛋白去甲基化酶 | 第15-17页 |
| ·组蛋白甲基转移酶 | 第15-16页 |
| ·组蛋白去甲基化酶 | 第16-17页 |
| 4 组蛋白甲基化的生物学功能 | 第17-20页 |
| ·组蛋白甲基化与组成型异染色质的形成 | 第17-19页 |
| ·组蛋白甲基化与X染色体失活 | 第19页 |
| ·组蛋白甲基化与基因印记 | 第19页 |
| ·组蛋白甲基化与基因的转录调控 | 第19-20页 |
| 5 组蛋白去甲基化与基因调控 | 第20-21页 |
| 6 组蛋白修饰与肌肉形成 | 第21页 |
| 7 Suv39h2、G9a和LSD1基因研究进展 | 第21-25页 |
| ·Suv39h2 | 第22页 |
| ·G9a | 第22-24页 |
| ·LSD1 | 第24-25页 |
| 8 研究的目的和意义 | 第25-26页 |
| 第二章 材料和方法 | 第26-43页 |
| 1 试验材料 | 第26-30页 |
| ·试验样品 | 第26页 |
| ·猪组织样品 | 第26页 |
| ·试验猪群体和性状测定 | 第26页 |
| ·主要仪器和设备 | 第26-27页 |
| ·主要药品及试剂 | 第27-28页 |
| ·载体和菌株 | 第28-29页 |
| ·缓冲液及常用试剂的配制 | 第29-30页 |
| 2 试验方法 | 第30-43页 |
| ·猪Suv39h2、G9a和LSD1基因cDNA的分离 | 第30-35页 |
| ·猪组织总RNA的提取及cDNA第一链的合成 | 第30-32页 |
| ·猪组织总RNA的提取 | 第30-31页 |
| ·RNA完整性的检测 | 第31页 |
| ·猪组织总RNA的RNase-free DNase Ⅰ处理及纯化 | 第31页 |
| ·cDNA第一链的合成 | 第31-32页 |
| ·依据"电子克隆"策略设计引物 | 第32页 |
| ·RT-PCR方法扩增cDNA | 第32-33页 |
| ·RT-PCR反应 | 第32-33页 |
| ·RT-PCR反应产物的检测 | 第33页 |
| ·cDNA产物的回收与纯化 | 第33-34页 |
| ·克隆与测序 | 第34-35页 |
| ·载体连接 | 第34页 |
| ·感受态细胞制备(CaCl_2法) | 第34页 |
| ·连接产物的转化 | 第34-35页 |
| ·阳性克隆的PCR鉴定和测序 | 第35页 |
| ·cDNA序列的生物信息学分析 | 第35页 |
| ·猪Suv39h2、G9a和LSD1基因的时空表达谱分析 | 第35-36页 |
| ·引物的设计 | 第35页 |
| ·RT-PCR反应 | 第35-36页 |
| ·RT-PCR反应产物的检测 | 第36页 |
| ·原核表达载体的构建及Western Blotting鉴定 | 第36-39页 |
| ·引物 | 第36-37页 |
| ·质粒的提取及酶切鉴定 | 第37页 |
| ·重组蛋白的诱导表达及SDS-PAGE检测 | 第37-38页 |
| ·重组蛋白表达条件的优化 | 第37-38页 |
| ·重组蛋白的SDS-PAGE检测 | 第38页 |
| ·重组蛋白的Western Blotting鉴定 | 第38-39页 |
| ·猪G9a基因DNA的分离 | 第39-41页 |
| ·猪血液基因组DNA的提取、浓度测定及质量检测 | 第39页 |
| ·猪基因组DNA的提取 | 第39页 |
| ·猪基因组DNA的浓度测定和质量检测 | 第39页 |
| ·引物设计 | 第39-41页 |
| ·猪G9a基因PCR扩增和序列分析 | 第41页 |
| ·PCR扩增 | 第41页 |
| ·PCR产物电泳检测 | 第41页 |
| ·PCR产物回收与纯化、克隆、测序 | 第41页 |
| ·猪G9a基因序列分析 | 第41页 |
| ·猪G9a基因PCR-RFLP分析 | 第41-42页 |
| ·统计分析 | 第42-43页 |
| 第三章 结果与分析 | 第43-78页 |
| 1 猪Suv39h2、G9a和LSD1基因cDNA分离 | 第43-56页 |
| ·猪组织总RNA的提取 | 第43页 |
| ·猪Suv39h2基因cDNA全序列的克隆及序列分析 | 第43-45页 |
| ·猪Suv39h2基因RT-PCR扩增及测序 | 第43-44页 |
| ·猪Suv39h2基因cDNA序列及推导的氨基酸序列 | 第44-45页 |
| ·推导的猪Suv39h2基因蛋白质的基本特征分析 | 第45页 |
| ·猪G9a基因cDNA全序列的克隆及序列分析 | 第45-50页 |
| ·猪G9a基因RT-PCR扩增及测序 | 第45-46页 |
| ·猪G9a基因cDNA序列及推导的氨基酸序列 | 第46-50页 |
| ·推导的猪G9a基因蛋白质的基本特征分析 | 第50页 |
| ·猪LSD1基因cDNA全序列的克隆及序列分析 | 第50-56页 |
| ·猪LSD1基因RT-PCR扩增及测序 | 第50-51页 |
| ·猪LSD1基因cDNA序列及推导的氨基酸序列 | 第51-55页 |
| ·推导的猪LSD1基因蛋白质的基本特征分析 | 第55-56页 |
| 2 猪Suv39h2、G9a和LSD1基因的时空表达谱 | 第56-58页 |
| ·猪Suv39h2、G9a和LSD1基因的组织表达谱 | 第56-57页 |
| ·猪Suv39h2、G9a和LSD1基因在不同发育时期肌肉组织中的表达谱 | 第57-58页 |
| 3 Suv39h2和G9a基因的原核表达 | 第58-62页 |
| ·原核表达载体的构建 | 第58-59页 |
| ·融合蛋白Suv39h2原核表达载体的构建 | 第58-59页 |
| ·融合蛋白G9a原核表达载体的构建 | 第59页 |
| ·表达产物的SDS-PAGE分析 | 第59-62页 |
| ·融合蛋白Suv39h2表达产物的SDS-PAGE分析 | 第59-61页 |
| ·最佳诱导时间的确定 | 第59-60页 |
| ·IPTG最佳诱导浓度的确定 | 第60页 |
| ·融合表达产物的可溶性分析 | 第60-61页 |
| ·融合蛋白G9a表达产物的SDS-PAGE分析 | 第61-62页 |
| ·最佳诱导时间的确定 | 第61页 |
| ·IPTG最佳诱导浓度的确定 | 第61页 |
| ·融合表达产物的可溶性分析 | 第61-62页 |
| ·表达产物的Western blotting分析 | 第62页 |
| ·融合蛋白Suv39h2表达产物的Western blotting分析 | 第62页 |
| ·融合蛋白G9a表达产物的Western blotting分析 | 第62页 |
| 4 猪G9a基因的基因组序列及结构分析 | 第62-66页 |
| ·猪G9a基因DNA序列扩增结果 | 第62-63页 |
| ·猪G9a基因DNA序列生物信息学分析 | 第63-66页 |
| 5 猪G9a基因的基因型分型与遗传效应分析 | 第66-78页 |
| ·PCR-Bsh1236I-RFLP | 第66-70页 |
| ·PCR-9bp插入/缺失变异-PAGE | 第70-73页 |
| ·PCR-MboI-RFLP | 第73-78页 |
| 第四章 讨论 | 第78-84页 |
| 1 "电子克隆"分离新基因 | 第78页 |
| 2 基因的选择性 | 第78-79页 |
| 3 G9a、Suv39h2和LSD1基因的时空表达谱 | 第79-80页 |
| 4 基因的原核表达 | 第80-81页 |
| 5 中外不同猪种间基因序列的多态性 | 第81页 |
| 6 遗传效应分析 | 第81-84页 |
| ·G9a基因第23内含子的多态性 | 第81-82页 |
| ·G9a基因第25内含子的多态性 | 第82页 |
| ·G9a基因3′UTR的多态性 | 第82-84页 |
| 第五章 小结 | 第84-86页 |
| 1 本研究获得的结果 | 第84-85页 |
| 2 本研究的创新点 | 第85页 |
| 3 本研究的不足之处 | 第85页 |
| 4 下一步值得研究的工作 | 第85-86页 |
| 参考文献 | 第86-91页 |
| 致谢 | 第91页 |
