| 摘要 | 第1-9页 |
| Abstract | 第9-11页 |
| 缩写词(Abbreviation) | 第11-12页 |
| 1 文献综述 | 第12-24页 |
| ·MHC的发现和命名 | 第12页 |
| ·MHCⅡ的结构和分布 | 第12-14页 |
| ·MHCⅡ类分子结构 | 第12-14页 |
| ·MHCⅡ分子的分布 | 第14页 |
| ·MHCⅡ分子的功能 | 第14-16页 |
| ·MHCⅡ类分子的抗原递呈 | 第14-15页 |
| ·约束免疫细胞间相互作用 | 第15页 |
| ·参与对免疫应答的遗传控制 | 第15页 |
| ·诱导自身或同种淋巴细胞反应 | 第15-16页 |
| ·参与T细胞分化过程 | 第16页 |
| ·γ链的功能 | 第16页 |
| ·MHC的遗传特点 | 第16-17页 |
| ·单倍型遗传 | 第16页 |
| ·多态性现象 | 第16-17页 |
| ·连锁不平衡 | 第17页 |
| ·MHC产物与基因的分型方法 | 第17-19页 |
| ·血清学分型 | 第17页 |
| ·细胞学方法 | 第17-18页 |
| ·DNA分型方法 | 第18-19页 |
| ·家禽的MHC研究 | 第19-21页 |
| ·MHC与疾病性状间的关系 | 第21-24页 |
| ·BOLA与牛的抗病性 | 第21页 |
| ·OLA与羊的抗病性 | 第21页 |
| ·SLA与猪的抗病性 | 第21-22页 |
| ·鸡MHC与抗病性的关系 | 第22-24页 |
| 2 研究的目的意义 | 第24-25页 |
| 3 材料与方法 | 第25-37页 |
| ·试验动物 | 第25页 |
| ·质粒和菌种 | 第25页 |
| ·主要工具酶及试剂 | 第25页 |
| ·主要溶液的配制 | 第25-27页 |
| ·主要仪器设备 | 第27-28页 |
| ·鸭MHCⅡ基因cDNA的合成 | 第28-29页 |
| ·引物设计 | 第28页 |
| ·总RNA的提取 | 第28页 |
| ·鸭cDNA第一链的合成 | 第28-29页 |
| ·RT-PCR扩增 | 第29页 |
| ·RT-PCR产物的回收 | 第29页 |
| ·鸭MHCⅡα和β基因的克隆与原核表达载体的构建 | 第29-33页 |
| ·回收的DNA片段与克隆载体pMD18-T的连接反应 | 第29页 |
| ·大肠杆菌DH5α或BL21(DE3)感受态细胞的制备(CaCl_2法) | 第29-30页 |
| ·连接产物的转化 | 第30页 |
| ·α互补检查法 | 第30页 |
| ·重组质粒DNA的提取 | 第30-32页 |
| ·重组质粒的鉴定 | 第32页 |
| ·表达载体pET-28a-α和pGEX-KG-β的构建 | 第32-33页 |
| ·鸭MHCⅡα和β基因的原核表达与鉴定 | 第33-34页 |
| ·重组质粒pET-28a-α和pGEX-KG-β的诱导表达 | 第33页 |
| ·pET-28a-α和pGEX-KG-β融合蛋白的可溶性鉴定 | 第33-34页 |
| ·pET-28a-α和pGEX-KG-β诱导表达条件的优化 | 第34页 |
| ·融合蛋白的纯化 | 第34-35页 |
| ·包涵体的溶解与复性 | 第35页 |
| ·融合蛋白的纯化 | 第35页 |
| ·蛋白浓度的确定 | 第35页 |
| ·鼠抗鸭MHCⅡα和β多克隆抗体的制备及鉴定 | 第35-37页 |
| ·抗原乳化 | 第35页 |
| ·鼠抗鸭多抗的制备 | 第35页 |
| ·免疫血清效价测定 | 第35-37页 |
| 4 结果与分析 | 第37-46页 |
| ·鸭MHCⅡα和β基因的克隆与鉴定 | 第37-40页 |
| ·鸭脾脏中的总RNA | 第37页 |
| ·RT-PCR扩增的鸭MHCⅡα和β基因 | 第37-38页 |
| ·重组质粒的鉴定 | 第38页 |
| ·重组表达质粒的鉴定 | 第38-40页 |
| ·融合蛋白的提取与鉴定 | 第40-41页 |
| ·表达融合蛋白的SDS-PAGE检测 | 第40页 |
| ·融合蛋白的可溶性鉴定 | 第40-41页 |
| ·融合蛋白的优化与纯化 | 第41-45页 |
| ·pET-28a-α和pGEX-KG-β诱导条件优化 | 第41-44页 |
| ·融合蛋白的纯化 | 第44-45页 |
| ·融合蛋白的浓度 | 第45页 |
| ·鼠抗鸭MHCⅡ多克隆抗体的鉴定 | 第45-46页 |
| 5 讨论 | 第46-52页 |
| ·鸭脾脏总RNA的提取及mRNA的反转录 | 第46-47页 |
| ·重组载体的构建 | 第47-48页 |
| ·DNA序列测定 | 第48页 |
| ·α和β基因在大肠杆菌BL2(DE3)中的诱导表达 | 第48页 |
| ·外源蛋白表达条件的优化 | 第48-51页 |
| ·诱导温度对目的蛋白表达量的影响 | 第49页 |
| ·起始诱导OD_(600)值对目的蛋白表达量的影响 | 第49-50页 |
| ·培养基的pH值对目的蛋白表达量的影响 | 第50页 |
| ·诱导时间对目的蛋白表达量的影响 | 第50页 |
| ·IPTG浓度对目的蛋白表达量的影响 | 第50-51页 |
| ·抗生素浓度对目的蛋白表达量的影响 | 第51页 |
| ·目标蛋白的分离、复性及纯化 | 第51页 |
| ·抗体制备 | 第51页 |
| ·下一步计划 | 第51-52页 |
| 6 结论 | 第52-53页 |
| 参考文献 | 第53-61页 |
| 致谢 | 第61-62页 |
| 附录 | 第62-66页 |
