| 摘要 | 第1-9页 |
| Abstract | 第9-12页 |
| 缩略语表(Abbreviation) | 第12-13页 |
| 1 前言 | 第13-26页 |
| ·牛结核病的流行现状及危害 | 第14-15页 |
| ·牛结核病的发现及病原 | 第15-16页 |
| ·牛结核病的流行病学 | 第16页 |
| ·临床症状 | 第16-17页 |
| ·免疫与发病机理 | 第17-18页 |
| ·机体抗牛分枝杆菌感染的免疫机理 | 第18-19页 |
| ·牛结核病的诊断 | 第19-26页 |
| ·牛结核病诊断抗原的研究 | 第19-21页 |
| ·牛结核病诊断方法的研究 | 第21-26页 |
| 2 研究目的与意义 | 第26-27页 |
| 3 材料与方法 | 第27-47页 |
| ·试验材料 | 第27-32页 |
| ·质粒及菌株 | 第27-29页 |
| ·血清及抗原蛋白 | 第29页 |
| ·主要试剂及材料 | 第29页 |
| ·质粒抽提与鉴定试剂的配制 | 第29-30页 |
| ·SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)缓冲液的配制 | 第30-31页 |
| ·Westernblot缓冲液的配制 | 第31页 |
| ·克隆表达融合蛋白其它试剂的配制 | 第31页 |
| ·寡核苷酸引物 | 第31-32页 |
| ·牛分枝杆菌抗原MPB70、MPB83、CFP-10和ESAT-6的融合基因的克隆表达方法 | 第32-40页 |
| ·PCR扩增目的基因片断 | 第32-33页 |
| ·PCR产物的回收与纯化 | 第33页 |
| ·感受态细胞的制备(氯化钙法) | 第33-34页 |
| ·质粒的转化 | 第34页 |
| ·质粒的制备 | 第34-35页 |
| ·重组质粒pET70-83-C10-E6的构建与鉴定 | 第35-36页 |
| ·重组质粒的诱导表达、SDS-PAGE分析和重组蛋白质的纯化 | 第36-39页 |
| ·融合蛋白的性质分析 | 第39-40页 |
| ·胶体金免疫层析方法的建立 | 第40-47页 |
| ·MPB83-胶体金复合物制备及纯化 | 第40-42页 |
| ·质控线兔抗MPB83蛋白IgG的制备与提纯 | 第42页 |
| ·MPB70与MPB83的同源性检测 | 第42-43页 |
| ·免疫层析法的建立 | 第43-47页 |
| ·检测线抗原和质控线抗体的包被 | 第43页 |
| ·金标垫的制备 | 第43页 |
| ·样品垫的处理 | 第43页 |
| ·试纸条的组装 | 第43-44页 |
| ·样本检测原理与结果判定 | 第44-45页 |
| ·特异性检验 | 第45页 |
| ·敏感性检验 | 第45页 |
| ·与细菌培养的比较试验 | 第45-47页 |
| ·与结核菌素皮内变态反应比较试验 | 第47页 |
| ·与韩国进口试纸条比较试验 | 第47页 |
| ·临床样品检测 | 第47页 |
| ·试纸条稳定性试验制备 | 第47页 |
| 4 结果与分析 | 第47-62页 |
| ·牛分枝杆菌抗原MPB70、MPB83、CFP-10和ESAT-6的融合基因的克隆表达结果 | 第47-53页 |
| ·mpb70、mpb83、cfp-10、esat-6的PCR产物 | 第47-48页 |
| ·重组质粒pUC19-70-L,pUC19-70-83-C10-E6和pET70-83-C10-E6的鉴定 | 第48-49页 |
| ·目的基因片段的序列分析 | 第49页 |
| ·诱导表达重组蛋白及其纯化 | 第49-50页 |
| ·融合蛋白的ELISA活性分析 | 第50-51页 |
| ·纯化蛋白的Westernblot分析 | 第51-52页 |
| ·融合蛋白的热稳定性分析 | 第52-53页 |
| ·牛结核病胶体金免疫层析方法建立结果 | 第53-62页 |
| ·MPB70与MPB83同源性检测 | 第53-54页 |
| ·胶体金的制备 | 第54-55页 |
| ·最适标记胶体金pH值的确定 | 第55-56页 |
| ·最适标记抗原量的确定 | 第56页 |
| ·质控线兔抗MPB83蛋白IgG提纯 | 第56-57页 |
| ·检测线抗原和质控线IgG最佳包被浓度的确定 | 第57页 |
| ·试纸条特异性试验 | 第57-58页 |
| ·试纸条敏感性试验 | 第58-59页 |
| ·与细菌培养的比较试验 | 第59-60页 |
| ·与结核菌素皮内变态反应比较试验 | 第60页 |
| ·与韩国进口试纸条比较试验 | 第60-61页 |
| ·临床样品的检测 | 第61-62页 |
| ·试纸条稳定性试验 | 第62页 |
| 5 讨论 | 第62-67页 |
| ·融合蛋白的克隆表达及特性探讨 | 第62-64页 |
| ·融合蛋白克隆表达 | 第62-64页 |
| ·融合蛋白特性分析 | 第64页 |
| ·融合蛋白的应用 | 第64页 |
| ·胶体金免疫层析方法的建立与应用探讨 | 第64-67页 |
| ·间接法和夹心法的选择 | 第64-65页 |
| ·抗原蛋白的选择 | 第65-66页 |
| ·胶体金免疫层析方法的建立 | 第66页 |
| ·胶体金免疫层析方法的应用 | 第66-67页 |
| 6 结论 | 第67-68页 |
| 参考文献 | 第68-78页 |
| 在读期间发表文章 | 第78-79页 |
| 致谢 | 第79页 |
