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大豆疫霉侵染早期机制的分子解析

中文摘要第1-12页
ABSTRACT第12-16页
引言第16-18页
上篇 文献综述第18-63页
 第一章 植物病原卵菌分子遗传学研究进展第18-42页
  1 卵菌的分类地位第19页
  2 卵菌病害第19-20页
  3 植物病原卵菌的生活史第20-21页
  4 卵菌与植物的相互作用第21-28页
   ·孢子囊的形成到游动孢子的游动第21-22页
   ·游动孢子寻根策略第22-24页
   ·游动孢子休止和定殖第24-25页
   ·休止孢萌发、附着胞或类似附着胞结构的形成第25-26页
   ·卵菌与植物的互作第26-28页
  5 生物防治第28-29页
  6 卵菌的遗传操作第29-32页
   ·卵菌转化技术和基因沉默研究第29-30页
   ·基因沉默机制第30-31页
   ·TILLING技术第31页
   ·蛋白质组研究第31-32页
   ·噬菌体展示技术第32页
  参考文献第32-42页
 第二章 真核病原生物的侵染策略第42-63页
  1 Plasmodium falciparum侵染人体红血球第43-45页
  2 Phytophthora infestans侵染植物第45-46页
  3 真核病原生物的寄主定位信号第46-48页
  4 真核病原生物寄主定位功能域的保守性第48-49页
  5 寄主定位泌出蛋白组的比较第49-53页
  6 侵染机制上其他的相似性第53-55页
   ·入侵和穿透寄主的机制第53-54页
   ·病原物繁殖时抑制寄主的蛋白酶第54-55页
  7 真核病原生物的聚类关系第55页
  8 总结第55-57页
  参考文献第57-63页
下篇 研究内容第63-173页
 第一章 大豆疫霉原生质体制备及再生菌株生物学性状研究第64-74页
  1 材料与方法第65-67页
   ·供试菌株和大豆品种第65-66页
   ·原生质体制备第66页
   ·原生质体和细胞核观察第66-67页
   ·原生质体再生率测定第67页
   ·原生质体再生菌株的生长速率和致病性测定第67页
  2 结果与分析第67-70页
   ·原生质体制备条件的确定第67-69页
   ·原生质体形成机制第69页
   ·原生质体再生菌株的生物学性状第69-70页
  3 讨论第70-71页
  参考文献第71-74页
 第二章 利用GFP研究大豆疫霉与大豆的互作第74-90页
  1 材料与方法第76-79页
   ·供试菌株和大豆品种第76-77页
   ·大豆疫霉转化载体第77页
   ·大豆疫霉的转化第77页
   ·GFP转化子的筛选确认和表达观察第77-78页
   ·生物学测定第78页
   ·转GFP菌株侵染大豆叶片、下胚轴、幼根的观察第78-79页
  2 结果与分析第79-84页
   ·GFP转化大豆疫霉的结果第79页
   ·GFP转化子的遗传稳定性分析第79-82页
   ·GFP示踪大豆疫霉侵染过程第82页
   ·亲和与非亲和互作芽管长度的比较第82-84页
  3 讨论第84-86页
  参考文献第86-90页
 第三章 大豆疫霉早期侵染互作表型研究第90-104页
  1 材料与方法第92-94页
   ·大豆疫霉菌株第92页
   ·供试植物第92页
   ·与植物互作的大豆疫霉菌丝观察第92-93页
   ·植物叶片染色第93页
   ·大豆疫霉附着胞的形成第93页
   ·过氧化氢对游动孢子休止、萌发的影响第93-94页
  2 结果与分析第94-101页
   ·与植物互作的大豆疫霉菌丝观察第94-95页
   ·大豆疫霉附着胞的形成第95-96页
   ·与大豆疫霉互作的寄主和非寄主植物反应表型第96页
   ·过氧化氢对游动孢子行为的影响第96-101页
  3 讨论第101页
  参考文献第101-104页
 第四章 大豆与大豆疫霉互作相关的氧化压力反应第104-126页
  1 材料与方法第106-109页
   ·供试菌株和大豆品种第106页
   ·H_2O_2的原位检测及其动态变化第106-107页
   ·过敏反应细胞死亡检测第107页
   ·互作中大豆PRs基因的转录水平变化第107-108页
   ·丙二醛含量动态变化第108页
   ·抗坏血酸和谷胱甘肽含量的变化第108-109页
   ·抗氧化系统酶活力测定第109页
   ·外源施用还原剂对互作的影响第109页
  2 结果与分析第109-120页
   ·大豆叶片中H_2O_2进发的组织定位和动态变化第109-111页
   ·病原菌诱导植物细胞死亡检测第111-113页
   ·大豆疫霉菌诱导大豆叶片防卫基因表达第113-114页
   ·抗氧化系统在互作中的作用第114-118页
   ·外源施用还原剂对互作的影响第118-120页
  3 讨论第120-122页
  参考文献第122-126页
 第五章 大豆疫霉侵染早期诱导表达基因的筛选第126-146页
  1 材料与方法第128-132页
   ·供试菌株和大豆材料第128-129页
   ·供试药剂和培养基第129页
   ·大豆接种第129-130页
   ·SSH差异筛选第130页
   ·dot-blot assay第130页
   ·DNA序列分析第130-131页
   ·virtual Northerns第131页
   ·反转录PCR(reverse transcriptase polymerase chain reaction,RT-PCR)第131-132页
  2.结果与分析第132-139页
   ·正向差减cDNA文库的建立第132-133页
   ·dot blots分析第133-135页
   ·DNA序列分析第135-139页
   ·Virtual Northern分析第139页
   ·RT-PCR分析第139页
  3 讨论第139-142页
  参考文献第142-146页
 第六章 大豆疫霉C_2H_2型锌指蛋白基因的克隆、表达分析及功能验证第146-160页
  1 材料与方法第147-151页
   ·供试菌株和大豆品种第147-148页
   ·供试药剂和培养基第148页
   ·大豆疫霉的接种及菌丝基因组DNA、RNA的提取和CDNA合成第148-149页
   ·Pszfl基因克隆、载体构建及序列分析第149页
   ·大豆疫霉的转化第149-150页
   ·致病性测定第150页
   ·对H_2O_2的耐受性第150页
   ·Southern杂交第150页
   ·Pszfl的转录水平分析第150-151页
  2 结果与分析第151-155页
   ·Pszfl基因克隆与序列分析第151-152页
   ·Pszfl的转录水平分析第152页
   ·Pszfl参与大豆疫霉的侵染和活性氧代谢第152-155页
  3 讨论第155-157页
  参考文献第157-160页
 第七章 大豆疫霉等渗调节基因Psbadhl的克隆与功能分析第160-173页
  1 材料与方法第161-164页
   ·供试菌株和大豆品种第161页
   ·供试药剂和培养基第161-162页
   ·大豆疫霉的接种及菌丝基因组DNA、RNA的提取和CDNA合成第162页
   ·Psbadhl基因克隆、载体构建及序列分析第162页
   ·大豆疫霉的转化第162-163页
   ·致病性测定第163页
   ·大豆疫霉菌株对NaCl的耐受性第163页
   ·大豆疫霉PsBADHl酶活性测定第163页
   ·Southern杂交第163-164页
   ·Psbadhl的转录水平分析第164页
  2 结果与分析第164-170页
   ·Psbadhl基因克隆第164-165页
   ·Psbadhl基因序列分析第165页
   ·Psbadhl的转录水平分析第165页
   ·Psbadhl参与应对盐胁迫第165-167页
   ·PSBADHl具有BADH酶活性第167-170页
  3 讨论第170-171页
  参考文献第171-173页
附录第173-180页
攻读博士学位期问发表的研究论文第180-182页
致谢第182页

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