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铜绿假单胞菌中影响RsmA调节基因的筛选及调节途径研究

中文摘要第1-5页
Abstract第5-10页
图表目录第10-12页
缩写对比表第12-13页
第一章 绪论第13-25页
   ·铜绿假单胞菌耐药机制第13-15页
     ·产生抗生素灭活酶或抗生素修饰酶第13-14页
     ·外膜低通透性第14页
     ·生物被膜第14页
     ·独特的药物主动外排系统第14-15页
     ·改变抗菌药物作用的靶位第15页
   ·铜绿假单胞菌的毒性因子(virulence factors)第15页
   ·Ⅲ型分泌系统(Type Ⅲ secretion system,TTSS)第15-16页
   ·群体感应系统(Quorum sensing,QS)第16-17页
     ·Las和Rhl系统第17页
     ·PQS系统第17页
   ·双组分调节系统(Two-component regulatory systems)第17-19页
     ·GacA-GacS第18页
     ·RetS第18-19页
     ·Lost adherence sensor(LadS)第19页
     ·FleR-FleS第19页
   ·RsmA的研究现状第19-23页
     ·RsmA与双组分系统的相互关系第20-21页
     ·RsmA与QS系统的相互关系第21-22页
     ·RsmA介导的调控网络第22-23页
   ·本课题研究内容和目的第23-25页
第二章 试验材料和方法第25-44页
   ·试验材料第25-28页
     ·菌株、引物和质粒第25-26页
     ·培养基的配置第26-28页
     ·试剂第28页
     ·仪器第28页
   ·试验方法第28-44页
     ·质粒的小量提取第28-29页
     ·细菌基因组DNA的制备第29-30页
     ·大肠杆菌感受态细胞的制备第30页
     ·铜绿假单胞菌感受态细胞的快速制备第30页
     ·聚合酶链式反应(PCR)的反应体系第30-31页
     ·酶切和连接反应第31页
     ·电转化第31-32页
     ·基因表达报道载体的构建第32-34页
     ·rsmA调节基因的筛选试验第34-38页
     ·互补实验第38页
     ·pgi基因敲除试验第38-39页
     ·双亲株试验第39-41页
     ·泳动试验(Swimming mobility)第41-42页
     ·丛动试验(Swarming mobility)第42页
     ·蹭行运动试验(Twitching mobility)第42页
     ·绿脓菌素的测定第42页
     ·刚果红试验(Congo-red test)第42页
     ·生物被膜(biofilm)的测定第42页
     ·转座突变株对抗生素的敏感性试验第42-44页
第三章 实验结果第44-56页
   ·突变体库的构建及筛选第44-47页
     ·载体的构建第44页
     ·随机转座突变体文库的筛选第44-45页
     ·突变体突变基因的确定第45-47页
   ·筛选菌株表型的变化第47-52页
     ·刚果红试验第47-48页
     ·运动性试验第48-49页
     ·生物膜测定试验结果第49-50页
     ·绿脓菌素测定实验第50-51页
     ·突变菌株的抗生素敏感试验第51-52页
   ·pgi对rsmA的调节作用第52-56页
     ·A7转座突变体互补试验第52-53页
     ·pgi基因敲除试验第53-54页
     ·Δpgi与rsmA的相互关系第54-56页
第四章 小结及讨论第56-58页
参考文献第58-66页
致谢第66页

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