| 英文缩写符号及其中英文对照表 | 第1-11页 |
| 中文摘要 | 第11-13页 |
| 英文摘要 | 第13-15页 |
| 1 引言 | 第15-29页 |
| ·植物细胞信号转导 | 第15-16页 |
| ·蛋白质的可逆磷酸化与蛋白激酶 | 第16-17页 |
| ·植物中的MAPK | 第17-27页 |
| ·MAPK 级联系统 | 第17-18页 |
| ·植物中MAPK 的结构特点 | 第18-19页 |
| ·植物中MAPK 的种类 | 第19-21页 |
| ·植物中MAPK 的功能 | 第21-27页 |
| ·MAPK 与干旱、高盐和低温胁迫信号传递 | 第21-22页 |
| ·MAPK 与植物机械损伤信号传递 | 第22-23页 |
| ·MAPK 与植物病原信号传递 | 第23-25页 |
| ·MAPK 与植物生长发育 | 第25-26页 |
| ·MAPK 与植物激素信号传递 | 第26-27页 |
| ·本研究的目的及意义 | 第27-29页 |
| 2 材料与方法 | 第29-54页 |
| ·实验材料 | 第29-31页 |
| ·植物材料 | 第29页 |
| ·植物材料培养与处理 | 第29页 |
| ·菌株与质粒 | 第29页 |
| ·酶与各种生化试剂 | 第29-30页 |
| ·PCR 引物 | 第30-31页 |
| ·实验方法 | 第31-54页 |
| ·RNA 提取 | 第31-32页 |
| ·利用RNeasy Plant Mini Kit 提取总RNA | 第31页 |
| ·利用TRIZOL 试剂盒提取RNA | 第31-32页 |
| ·cDNA 第一链的合成 | 第32页 |
| ·cDNA 回收纯化 | 第32-33页 |
| ·cDNA 的5′加尾反应 | 第33页 |
| ·cDNA 全长序列的获得 | 第33-36页 |
| ·简并引物PCR 获得GhMAPK 中间片段 | 第33-34页 |
| ·5′RACE 获得5′端序列 | 第34页 |
| ·3′RACE 获得3′端序列 | 第34-35页 |
| ·cDNA 全长序列的获得 | 第35-36页 |
| ·GhMAPK 全长基因组序列的获得 | 第36页 |
| ·目的片段的回收 | 第36-37页 |
| ·目的片段与克隆载体的连接 | 第37页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞制备 | 第37页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞的转化 | 第37-38页 |
| ·质粒DNA 的提取 | 第38-40页 |
| ·碱法小量提取质粒DNA | 第38页 |
| ·大量法提取质粒DNA | 第38-40页 |
| ·试剂盒质粒微量提取方案 | 第40页 |
| ·对重组质粒的酶切鉴定 | 第40-41页 |
| ·Northern 杂交 | 第41-43页 |
| ·RNA 提取 | 第41页 |
| ·琼脂糖甲醛变性胶电泳 | 第41页 |
| ·转膜及烘膜 | 第41-42页 |
| ·探针合成 | 第42页 |
| ·预杂交及杂交 | 第42-43页 |
| ·Southern 杂交 | 第43-44页 |
| ·基因组DNA 的提取 | 第43页 |
| ·限制性内切酶消化 | 第43-44页 |
| ·转膜 | 第44页 |
| ·探针合成 | 第44页 |
| ·预杂交及杂交 | 第44页 |
| ·植物表达载体的构建与转化 | 第44-47页 |
| ·植物正义表达载体的构建 | 第44-45页 |
| ·农杆菌感受态细胞的制备 | 第45页 |
| ·冻融法转化农杆菌 | 第45-46页 |
| ·农杆菌介导转化烟草 | 第46-47页 |
| ·原核表达及抗体制备 | 第47-50页 |
| ·试剂配制 | 第47-48页 |
| ·原核表达载体的构建 | 第48页 |
| ·大肠杆菌BL21 原核表达的诱导 | 第48页 |
| ·聚丙烯酰胺凝胶电泳 | 第48-49页 |
| ·抗体的制备 | 第49-50页 |
| ·抗血清效价的测定 | 第50页 |
| ·Western 杂交 | 第50-52页 |
| ·烟草叶片总蛋白质的提取 | 第50页 |
| ·半干法蛋白转移 | 第50-51页 |
| ·免疫检测 | 第51页 |
| ·显色法检测蛋白质 | 第51-52页 |
| ·病毒含量的ELISA 检测 | 第52-54页 |
| 3. 结果与分析 | 第54-77页 |
| ·棉花促丝裂原活化蛋白激酶基因的分离 | 第54-57页 |
| ·棉花RNA 的提取及反转录 | 第54页 |
| ·GhMAPK 中间片段的分离 | 第54页 |
| ·GhMAPK 5′片段的分离 | 第54-55页 |
| ·GhMAPK 3′片段的分离 | 第55-56页 |
| ·GhMAPK 全长cDNA 的分离 | 第56-57页 |
| ·GhMAPK 的序列分析 | 第57-63页 |
| ·GhMAPK 的全长cDNA 分析 | 第57-59页 |
| ·GhMAPK 编码蛋白序列分析 | 第59-62页 |
| ·GhMAPK 预测蛋白的跨膜结构分析 | 第62-63页 |
| ·GhMAPK 基因组序列分析 | 第63页 |
| ·GhMAPK 在棉花基因组中的拷贝数分析 | 第63-64页 |
| ·GhMAPK 的表达特性分析 | 第64-68页 |
| ·非生物胁迫下GhMAPK mRNA 水平的变化 | 第64-66页 |
| ·信号分子对GhMAPK mRNA 水平的影响 | 第66-67页 |
| ·生物胁迫下GhMAPK mRNA 的积累 | 第67-68页 |
| ·GhMAPK 基因的原核诱导表达及抗体制备 | 第68-69页 |
| ·GhMAPK 基因在烟草中的超表达及转基因烟草的抗性鉴定 | 第69-77页 |
| ·转基因烟草表达载体的构建 | 第69-70页 |
| ·T0 代转基因植株的鉴定 | 第70-71页 |
| ·转基因植株的PCR 鉴定 | 第70页 |
| ·转基因植株的Northern 杂交 | 第70-71页 |
| ·转基因植株的Western 杂交 | 第71页 |
| ·T1 代转基因植株的鉴定及转基因植株的抗性分析 | 第71-77页 |
| ·T1 代转基因植株的PCR 鉴定 | 第71-72页 |
| ·病毒抗性分析 | 第72-73页 |
| ·真菌抗性分析 | 第73-75页 |
| ·GhMAPK 过表达烟草抗性机制的初步推测及下步计划 | 第75-77页 |
| 4 讨论 | 第77-80页 |
| ·GhMAPK 属于C 组MAPK 家族 | 第77页 |
| ·GhMAPK 受多种环境胁迫诱导 | 第77-78页 |
| ·GhMAPK 对转基因烟草抗性的作用 | 第78-80页 |
| 5 小结 | 第80-81页 |
| 参考文献 | 第81-90页 |
| 附录 | 第90-93页 |
| 致谢 | 第93-94页 |
| 附: 硕士阶段已发表论文 | 第94页 |
