| 摘要 | 第1-6页 |
| Abstract | 第6-13页 |
| 前言 | 第13-25页 |
| 1 糖链与肿瘤 | 第13-16页 |
| ·N-聚糖分支的变更 | 第13-14页 |
| ·唾液酸数量、连键以及乙酰化的改变 | 第14页 |
| ·N-羟乙酰神经氨酸在人肿瘤中的表达 | 第14页 |
| ·糖胺聚糖表达的变更 | 第14-15页 |
| ·糖基化的改变的粘蛋白的病理作用 | 第15页 |
| ·癌细胞表面唾液酸化的Lewis结构和选凝素配体 | 第15页 |
| ·半乳凝素和多聚乳糖胺的表达 | 第15-16页 |
| 2 糖基转移酶 | 第16-18页 |
| ·糖基转移酶结构与功能 | 第16页 |
| ·糖基转移酶反应的一般性质 | 第16-17页 |
| ·糖基转移酶的程序性作用 | 第17页 |
| ·糖基转移酶和疾病 | 第17-18页 |
| 3 O-GlcNAc 基转移酶 | 第18-25页 |
| ·OGT结构 | 第18-19页 |
| ·O-GIcNAc修饰的蛋白 | 第19-21页 |
| ·O-GIcNAc修饰与磷酸化 | 第21-22页 |
| ·O-GIcNAc修饰的功能 | 第22-23页 |
| ·O-GIcNAc修饰与疾病 | 第23-25页 |
| 实验部分 | 第25-61页 |
| 第一部分 基因芯片和实时定量 PCR 技术检测小鼠乳腺癌细胞中差异表 达的糖基转移酶基因 | 第25-40页 |
| 1 材料 | 第25-27页 |
| ·细胞系 | 第25页 |
| ·主要试剂 | 第25-26页 |
| ·仪器 | 第26页 |
| ·基因芯片材料 | 第26-27页 |
| 2 方法 | 第27-33页 |
| ·细胞培养 | 第27页 |
| ·基因芯片实验和分析方法 | 第27-31页 |
| ·实时定量PCR的实验和分析方法 | 第31-33页 |
| 3 结果 | 第33-38页 |
| ·细胞总RNA质量的分析 | 第33-34页 |
| ·基因芯片自身杂交结果分析 | 第34-35页 |
| ·基因芯片杂交结果分析 | 第35-36页 |
| ·定量PCR验证差异表达的糖基转移酶基因 | 第36-38页 |
| 4 讨论 | 第38-40页 |
| 第二部分 OGT 干扰细胞株的构建 | 第40-54页 |
| 1 材料 | 第40-41页 |
| ·细胞株 | 第40页 |
| ·菌种和载体 | 第40页 |
| ·试剂 | 第40-41页 |
| ·仪器 | 第41页 |
| 2 方法 | 第41-49页 |
| ·OGT干扰载体的构建 | 第41-46页 |
| ·质粒的大量抽提 | 第46页 |
| ·细胞转染和阳性克隆筛选 | 第46-47页 |
| ·定量PCR检测OGT mRNA的表达 | 第47-48页 |
| ·流式细胞仪检测细胞内O-GlcNAc糖链的表达 | 第48-49页 |
| ·统计学处理 | 第49页 |
| 3 结果 | 第49-51页 |
| ·干扰载体构建 | 第49页 |
| ·干扰片段对OGT mRNA的表达的影响 | 第49-50页 |
| ·干扰片段对OGT表达活性的影响 | 第50-51页 |
| 4 讨论 | 第51-54页 |
| 第三部分OGT 基因沉默对小鼠乳腺癌细胞4T1 生物学特性的影响 | 第54-61页 |
| 1 材料 | 第54-55页 |
| ·试剂 | 第54页 |
| ·仪器 | 第54-55页 |
| 2 方法 | 第55-56页 |
| ·细胞复苏 | 第55页 |
| ·细胞培养及传代 | 第55页 |
| ·MTT法检测细胞增殖活性 | 第55页 |
| ·Transwell小室法测定细胞迁移能力 | 第55-56页 |
| ·细胞侵袭能力的检测 | 第56页 |
| ·统计学处理 | 第56页 |
| 3 结果 | 第56-59页 |
| ·MTT法检测OGT基因沉默后对乳腺癌细胞增殖活性的影响 | 第56-57页 |
| ·Transwell小室法检测乳腺癌细胞体外迁移能力的变化 | 第57-58页 |
| ·细胞侵袭能力的变化 | 第58-59页 |
| 4 讨论 | 第59-61页 |
| 总结和展望 | 第61-62页 |
| 参考文献 | 第62-69页 |
| 致谢 | 第69页 |
