| 摘要 | 第1-11页 |
| Abstract | 第11-14页 |
| 第一部分 文献综述 | 第14-43页 |
| 第一章 溶藻弧菌的生物学特性及毒力因子研究进展 | 第15-28页 |
| 1 溶藻弧菌的生物学特性 | 第15-17页 |
| 2 溶藻弧菌的毒力因子及致病性 | 第17-22页 |
| 参考文献 | 第22-28页 |
| 第二章 鱼类基因工程疫苗研究进展 | 第28-43页 |
| 1 鱼类的免疫系统 | 第28-30页 |
| ·鱼类的免疫器官与组织 | 第28-29页 |
| ·鱼类的免疫应答类型 | 第29-30页 |
| 2 鱼类疫苗的发展历程 | 第30-31页 |
| 3 鱼类基因工程疫苗 | 第31-36页 |
| ·基因工程亚单位疫苗 | 第32-33页 |
| ·基因工程活载体疫苗 | 第33-34页 |
| ·核酸疫苗 | 第34-35页 |
| ·抗独特型疫苗 | 第35-36页 |
| 4 展望 | 第36-37页 |
| 参考文献 | 第37-43页 |
| 第二部分 研究内容 | 第43-144页 |
| 第三章 溶藻弧菌的鉴定 | 第44-53页 |
| 1 材料与方法 | 第45-46页 |
| ·病原菌的分离 | 第45页 |
| ·人工感染试验和LD_(50)测定 | 第45页 |
| ·病原菌的再分离与生化鉴定 | 第45-46页 |
| ·病原菌的16S rRNA基因序列分析 | 第46页 |
| ·病原菌药敏试验 | 第46页 |
| 2 结果 | 第46-50页 |
| ·人工感染试验和LD_(50)测定 | 第46-47页 |
| ·病原菌的生化鉴定结果 | 第47-48页 |
| ·病原菌的16S rRNA鉴定结果 | 第48-50页 |
| ·药敏试验结果 | 第50页 |
| 3 讨论 | 第50-51页 |
| 参考文献 | 第51-53页 |
| 第四章 溶藻弧菌铁调蛋白和鞭毛蛋白基因的克隆、表达及其特征分析 | 第53-71页 |
| 1 材料与方法 | 第55-59页 |
| ·细菌菌株和质粒 | 第55-56页 |
| ·工具酶与试剂 | 第56页 |
| ·溶藻弧菌总DNA的提取 | 第56页 |
| ·引物的设计与fur基因的克隆 | 第56页 |
| ·序列特征和生物信息学分析 | 第56-57页 |
| ·重组表达载体的构建与原核表达 | 第57页 |
| ·表达产物纯化 | 第57-58页 |
| ·兔抗血清制备 | 第58页 |
| ·SDS-PAGE和Western blot分析 | 第58页 |
| ·fur的功能性互补 | 第58-59页 |
| 2 结果 | 第59-66页 |
| ·fur和flaA基因的克隆 | 第59页 |
| ·序列特征 | 第59-62页 |
| ·Fur和FlaA蛋白的高级结构预测 | 第62-65页 |
| ·表达分析 | 第65页 |
| ·fur的功能性互补 | 第65-66页 |
| 3 讨论 | 第66-68页 |
| 参考文献 | 第68-71页 |
| 第五章 溶藻弧菌二个蛋白酶类主要毒力相关基因的克隆和表达 | 第71-93页 |
| 1 材料和方法 | 第73-84页 |
| ·菌株、质粒和试剂 | 第73页 |
| ·细菌DNA抽提 | 第73页 |
| ·引物设计与基因片段的PCR扩增 | 第73-76页 |
| ·重组表达质粒pET-ValC和pET-AspA的构建 | 第76-81页 |
| ·重组质粒的原核表达及表达产物纯化 | 第81-82页 |
| ·表达产物的SDS-PAGE检测 | 第82-83页 |
| ·融合蛋白多克隆抗体的制备 | 第83页 |
| ·表达产物的Western blot分析 | 第83-84页 |
| ·蛋白高级结构的预测和生物信息学分析 | 第84页 |
| 2 结果 | 第84-89页 |
| ·目的基因PCR扩增结果 | 第84-85页 |
| ·ValC和AspA蛋白高级结构的预测 | 第85-87页 |
| ·重组质粒的鉴定 | 第87-88页 |
| ·重组融合蛋白的表达检测 | 第88-89页 |
| 3 讨论 | 第89-90页 |
| 参考文献 | 第90-93页 |
| 第六章 溶藻弧菌二种主要外膜蛋白基因的克隆、表达和特征分析 | 第93-109页 |
| 1 材料与方法 | 第95-99页 |
| ·细菌菌株和质粒 | 第95-96页 |
| ·工具酶与试剂 | 第96页 |
| ·基因组提取 | 第96页 |
| ·基因克隆 | 第96-97页 |
| ·序列特征和生物信息学分析 | 第97页 |
| ·重组表达载体的构建与原核表达 | 第97-98页 |
| ·表达产物纯化 | 第98页 |
| ·兔抗血清制备 | 第98页 |
| ·SDS-PAGE和Western blot分析 | 第98-99页 |
| 2.结果 | 第99-106页 |
| ·基因克隆结果 | 第99-100页 |
| ·序列特征 | 第100-103页 |
| ·蛋白高级结构预测 | 第103-104页 |
| ·重组蛋白的表达与检测 | 第104-106页 |
| 3.讨论 | 第106-107页 |
| 参考文献 | 第107-109页 |
| 第七章 ompW-aspA融合基因表达载体的构建及表达 | 第109-130页 |
| 1 材料和方法 | 第110-119页 |
| ·宿主菌株和载体 | 第110页 |
| ·试验试剂 | 第110-111页 |
| ·融合基因的PCR扩增 | 第111-115页 |
| ·重组质粒pET-AspA-OmpW和pET-Omp W-AspA的构建 | 第115-118页 |
| ·重组质粒的原核表达及表达产物纯化 | 第118页 |
| ·表达产物的SDS-PAGE检测和Western blot分析 | 第118-119页 |
| 2 结果 | 第119-126页 |
| ·引物设计和目的基因PCR扩增 | 第119页 |
| ·融合基因原核表达的构建 | 第119-121页 |
| ·重组质粒的鉴定 | 第121-124页 |
| ·重组融合蛋白的表达检测 | 第124-126页 |
| 3 讨论 | 第126-127页 |
| 参考文献 | 第127-130页 |
| 第八章 溶藻弧菌主要毒力相关基因表达重组蛋白的免疫原性研究 | 第130-141页 |
| 1 材料与方法 | 第132-134页 |
| ·试验菌株和培养基 | 第132页 |
| ·试验鱼 | 第132页 |
| ·抗原准备 | 第132页 |
| ·安全性评估 | 第132页 |
| ·免疫 | 第132-133页 |
| ·攻毒菌液准备 | 第133页 |
| ·采血与攻毒 | 第133页 |
| ·兔抗血清准备 | 第133页 |
| ·间接ELISA检测抗体效价 | 第133-134页 |
| 2 结果 | 第134-138页 |
| ·安全性评估 | 第134页 |
| ·抗体效价 | 第134-136页 |
| ·免疫保护率 | 第136-138页 |
| ·病原菌检测 | 第138页 |
| 3 讨论 | 第138-139页 |
| 参考文献 | 第139-141页 |
| 第九章 总结与展望 | 第141-144页 |
| 1 主要结论和创新点 | 第141-143页 |
| 2 展望 | 第143-144页 |
| 第三部分 附录 | 第144-151页 |
| 附录1 常用试剂及培养基配方 | 第145-150页 |
| 附录2 攻读博士学位期间发表(录用)的学术论文 | 第150-151页 |
| 致谢 | 第151-152页 |
