| 第一章 绪论 | 第1-40页 |
| 1.本课题的研究背景和意义 | 第13-15页 |
| ·研究背景 | 第13-14页 |
| ·研究的目的和意义 | 第14-15页 |
| 2.海藻糖的结构和理化性质 | 第15-16页 |
| 3.海藻糖的生物学功能 | 第16-22页 |
| ·原核生物中海藻糖的生物学功能 | 第17-19页 |
| ·酵母菌和其他丝状真菌中海藻糖的生物学功能 | 第19-21页 |
| ·动物中海藻糖的生物学功能 | 第21页 |
| ·植物中海藻糖的生物学功能 | 第21-22页 |
| 4.海藻糖的应激保护作用及作用机制 | 第22-25页 |
| ·海藻糖的抗脱水作用 | 第22-23页 |
| ·海藻糖对生物膜的保护作用 | 第23页 |
| ·海藻糖对脂质体的保护作用 | 第23页 |
| ·海藻糖对生物大分子的保护机制 | 第23-25页 |
| 5.海藻糖的代谢途径 | 第25-29页 |
| ·海藻糖的生物合成途径 | 第25-28页 |
| ·海藻糖分解代谢途径 | 第28-29页 |
| 6.海藻糖的代谢调控 | 第29-36页 |
| ·大肠杆菌中海藻糖的代谢调控 | 第29-31页 |
| ·酵母中海藻糖的代谢调控 | 第31-36页 |
| 7.海藻糖的应用 | 第36-38页 |
| ·食品工业 | 第36页 |
| ·保健品领域 | 第36页 |
| ·医药工业 | 第36-37页 |
| ·化妆品工业 | 第37页 |
| ·精细化工 | 第37页 |
| ·分子生物学研究 | 第37-38页 |
| ·农业领域 | 第38页 |
| 8.海藻糖相关研究展望 | 第38-40页 |
| ·海藻糖生物工程生产 | 第38页 |
| ·运用分子生物学研究开发海藻糖制备新工艺 | 第38-39页 |
| ·结合海藻糖晶体结构、物理构象和化学特性深入研究其保护作用机制 | 第39-40页 |
| ·深入研究海藻糖的功能特性,进一步扩大在食品中的应用 | 第40页 |
| 第二章 扣囊复膜酵母海藻糖酶基因缺陷突变株的筛选 | 第40-51页 |
| 1.材料 | 第41-42页 |
| ·菌株 | 第41页 |
| ·培养基 | 第41-42页 |
| ·主要试剂 | 第42页 |
| 2.方法 | 第42-45页 |
| ·EMS诱变 | 第42-43页 |
| ·突变株的筛选 | 第43页 |
| ·海藻糖的测定 | 第43-44页 |
| ·细胞浓度的测定 | 第44页 |
| ·粗酶液的制备 | 第44页 |
| ·酸性海藻糖酶(Ath1)酶活力的测定 | 第44页 |
| ·中性海藻糖酶(Nth1)酶活力的测定 | 第44-45页 |
| ·突变株和野生型菌株在YPS培养基中的生长量和海藻糖积累量的比较 | 第45页 |
| ·突变株和野生型菌株中酸性和中性海藻糖酶活力的比较 | 第45页 |
| 3.结果与讨论 | 第45-49页 |
| ·扣囊复膜酵母的海藻糖酶突变株的筛选 | 第45-46页 |
| ·突变株A11和野生型菌株在YPS培养基中生长量的比较 | 第46-47页 |
| ·突变株A11和野生型菌株在YPS培养基中海藻糖积累量的比较 | 第47-48页 |
| ·突变株A11和野生型菌株酸性和中性海藻糖酶活力比较 | 第48-49页 |
| 4.本章小结 | 第49-51页 |
| 第三章 扣囊复膜酵母海藻糖合成途径的确定 | 第51-62页 |
| 1.材料和方法 | 第51-55页 |
| ·菌种 | 第51页 |
| ·试剂与培养基 | 第51-52页 |
| ·细胞破碎方法的选择 | 第52-53页 |
| ·粗酶液的制备 | 第53页 |
| ·6-磷酸海藻糖合成酶活力的测定 | 第53-54页 |
| ·海藻糖合酶活力的测定 | 第54页 |
| ·总蛋白的测定 | 第54页 |
| ·比活力的计算 | 第54页 |
| ·还原糖的测定 | 第54页 |
| ·培养基中葡萄糖浓度对海藻糖积累的影响 | 第54页 |
| ·不同培养基对6-磷酸海藻糖合成酶活力和海藻糖积累的影响 | 第54-55页 |
| ·6-磷酸海藻糖合成酶活力测定时最佳酶反应时间的确定 | 第55页 |
| 2.结果与讨论 | 第55-60页 |
| ·细胞破碎方法的确定 | 第55-56页 |
| ·扣囊覆膜酵母A11海藻糖生物合成途径的确定 | 第56-58页 |
| ·葡萄糖对扣囊复膜酵母A11海藻糖合成的影响 | 第58-59页 |
| ·A11在YPD和YPS培养基中的6-磷酸海藻糖合成酶活力和海藻糖含量 | 第59-60页 |
| ·6-磷酸海藻糖合成酶酶活测定时最佳酶反应时间的确定 | 第60页 |
| 3.本章小结 | 第60-62页 |
| 第四章 扣囊覆膜酵母A11细胞内6-磷酸海藻糖合成酶的分离纯化及特性研究 | 第62-80页 |
| 1.材料 | 第63-64页 |
| ·菌种 扣囊复膜酵母海藻糖酶缺陷突变株A11 | 第63页 |
| ·试剂与培养基 | 第63-64页 |
| 2.方法 | 第64-70页 |
| ·总蛋白的测定 | 第64页 |
| ·粗酶液的制备 | 第64页 |
| ·超滤浓缩 | 第64-65页 |
| ·Sephrose CL-4B凝胶过滤 | 第65页 |
| ·DEAE-Sephorose Fast Flow阴离子交换 | 第65-66页 |
| ·超滤浓缩收集液 | 第66页 |
| ·不连续SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE) | 第66-68页 |
| ·连续常规聚丙烯酰胺凝胶电泳(Native-PAGE) | 第68页 |
| ·6-磷酸海藻糖合成酶活性测定 | 第68-69页 |
| ·酶的最适反应温度和温度稳定性 | 第69页 |
| ·酶的最适反应pH和pH稳定性 | 第69页 |
| ·金属离子对酶活性的影响 | 第69页 |
| ·各种化合物对酶活性的影响 | 第69页 |
| ·Km值的测定 | 第69-70页 |
| 3.结果与讨论 | 第70-79页 |
| ·6-磷酸海藻糖合成酶的分离与纯化 | 第70-73页 |
| ·温度对6-磷酸海藻糖合成酶活性的影响 | 第73-74页 |
| ·pH对6-磷酸海藻糖合成酶活性的影响 | 第74-76页 |
| ·金属离子对酶活性的影响 | 第76-77页 |
| ·不同化合物对酶活性的影响 | 第77-78页 |
| ·酶的动力学常数 | 第78-79页 |
| 4.本章小结 | 第79-80页 |
| 第五章 6-磷酸海藻糖合成酶部分基因的克隆 | 第80-104页 |
| 1.材料与方法 | 第80-86页 |
| ·材料 | 第80-81页 |
| ·扣囊复膜酵母基因组DNA的提取 | 第81-82页 |
| ·引物设计 | 第82页 |
| ·简并PCR扩增 | 第82-83页 |
| ·PCR产物的回收 | 第83页 |
| ·PCR产物的克隆 | 第83-86页 |
| 2.结果及分析 | 第86-102页 |
| ·简并引物的设计原理 | 第86-88页 |
| ·CoDeHOP简并引物的设计 | 第88-97页 |
| ·简并PCR结果 | 第97-98页 |
| ·PCR产物的克隆 | 第98页 |
| ·6-磷酸海藻糖合成酶基因部分序列及推测的氨基酸序列的比对 | 第98-100页 |
| ·扣囊复膜酵母β-actin部分基因的克隆 | 第100-102页 |
| 3.本章小结 | 第102-104页 |
| 第六章 不同逆境条件下海藻糖的积累和TPS1基因的表达 | 第104-115页 |
| 1.材料与方法 | 第105-109页 |
| ·材料 | 第105页 |
| ·逆境胁迫试验 | 第105页 |
| ·6-磷酸海藻糖合成酶活性的测定 | 第105-106页 |
| ·总蛋白的测定 | 第106页 |
| ·比活力的计算 | 第106页 |
| ·海藻糖的测定 | 第106-107页 |
| ·细胞干重的测定 | 第107页 |
| ·RT-PCR引物设计 | 第107页 |
| ·扣囊复膜酵母总RNA的抽提 | 第107-108页 |
| ·总RNA的纯度和含量测定 | 第108页 |
| ·RNA甲醛变性琼脂糖电泳 | 第108页 |
| ·反转录 | 第108页 |
| ·RT-PCR | 第108-109页 |
| 2.结果与讨论 | 第109-114页 |
| ·总RNA的质量 | 第109-110页 |
| ·不同逆境胁迫对扣囊复膜酵母6-磷酸海藻糖合成酶活力和海藻糖积累的影响 | 第110-112页 |
| ·不同逆境胁迫对扣囊复膜酵母6-磷酸海藻糖合成酶基因表达的影响 | 第112-114页 |
| 3.本章小结 | 第114-115页 |
| 结论、创新点与展望 | 第115-119页 |
| 参考文献 | 第119-129页 |
| 攻读博士学位期间发表和接收的论文 | 第129-130页 |
| 致谢 | 第130页 |
