| 摘要 | 第1-4页 |
| Abstract | 第4-8页 |
| 前言 | 第8-17页 |
| 第一部分 抗猪呼吸与繁殖障碍综合征病毒单克隆抗体的研究 | 第17-24页 |
| 1 器材与试剂 | 第17-18页 |
| ·结胞及毒株 | 第17页 |
| ·实验动物 | 第17页 |
| ·其他普通生化试剂及配制 | 第17-18页 |
| ·常用器材 | 第18页 |
| 2 方法 | 第18-21页 |
| ·病毒的增殖 | 第18-19页 |
| ·抗原制备与提纯 | 第19页 |
| ·免疫耐受小鼠准备 | 第19页 |
| ·抗原注射 | 第19页 |
| ·细胞的融合 | 第19-21页 |
| ·杂交瘤细胞的单克隆操作 | 第21页 |
| ·杂交瘤细胞腹水的制备 | 第21页 |
| 3 结果 | 第21-22页 |
| ·免疫抗体效价测定 | 第21-22页 |
| ·阳性杂交瘤细胞的筛选和克隆 | 第22页 |
| 4 讨论 | 第22-23页 |
| 小结： | 第23-24页 |
| 第二部分 PRRSV N 蛋白表达抗原的研究 | 第24-31页 |
| 1 实验动物及试剂 | 第25页 |
| ·实验动物 | 第25页 |
| ·分子生物学试剂 | 第25页 |
| ·抗PRRS N 蛋白单克隆抗体 | 第25页 |
| ·引物设计 | 第25页 |
| 2 方法 | 第25-27页 |
| ·PCR扩增 | 第25-26页 |
| ·PRRSV N 蛋白基因的克隆 | 第26页 |
| ·克隆基因的序列分析 | 第26页 |
| ·重组质粒的再转化及诱导表达 | 第26页 |
| ·表达产物的鉴定 | 第26-27页 |
| 3 实验结果 | 第27-29页 |
| ·PCR结果 | 第27页 |
| ·克隆质粒酶切筛选结果 | 第27-28页 |
| ·重组质粒DNA测序结果 | 第28页 |
| ·表达产物结果 | 第28-29页 |
| ·western-blot结果 | 第29页 |
| 4 讨论 | 第29-30页 |
| 小结： | 第30-31页 |
| 第三部分 猪呼吸与繁障碍综合征病毒抗体竞争ELISA检测技术研究 | 第31-39页 |
| 1、材料与方法 | 第32页 |
| ·阴性血清 | 第32页 |
| ·PRRSV人工攻毒猪血清克 | 第32页 |
| ·临床血清 | 第32页 |
| ·对照样品 | 第32页 |
| ·猪呼吸与繁殖障碍综合征抗体检测试剂盒 | 第32页 |
| ·纯化的基因工程表达PRRS N 蛋白 | 第32页 |
| ·常用器材 | 第32页 |
| 2 方法 | 第32-34页 |
| ·标准阴性血清及阳性血清制备 | 第32-33页 |
| ·间接ELISA测定应用基因工程抗原和单克隆抗体的反应适应性及最佳ELISA反应浓度 | 第33页 |
| ·竞争ELISA检测限值的确定 | 第33-34页 |
| ·检测敏感性研究 | 第34页 |
| ·特异性研究 | 第34页 |
| ·竞争ELISA和间接ELISA实验比对 | 第34页 |
| 3、结果与分析 | 第34-38页 |
| ·基因工程抗原和单克隆抗体最佳反应浓度测定结果 | 第34-35页 |
| ·ELISA cut off值研究结果 | 第35-36页 |
| ·特异性研究结果 | 第36-37页 |
| ·敏感性研究及检测比对结果 | 第37-38页 |
| 4、讨论 | 第38-39页 |
| 结论 | 第39-40页 |
| 参考文献 | 第40-44页 |
| 致谢 | 第44页 |
