中文摘要 | 第1-7页 |
英文摘要 | 第7-10页 |
文献综述 | 第10-22页 |
1.动物细胞核移植技术研究的历史与现状 | 第11-12页 |
2.动物细胞核移植的操作程序 | 第12-18页 |
·MⅡ期卵母细胞的去核 | 第12-14页 |
·盲吸去核法 | 第12页 |
·活性荧光染料染色去核法 | 第12-13页 |
·半卵去核法 | 第13页 |
·微分干涉和极性显微镜去核法 | 第13页 |
·功能性去核法 | 第13页 |
·化学试剂去核法 | 第13页 |
·末期去核法 | 第13页 |
·蔗糖去核法 | 第13-14页 |
·供核细胞的准备 | 第14-18页 |
·关于供核细胞的种类问题 | 第14页 |
·关于供核细胞的来源问题 | 第14页 |
·关于供核细胞细胞周期与受体卵母细胞胞质状态的协调问题 | 第14-15页 |
·核移植胚胎的重构(供核细胞的移植) | 第15页 |
·供核细胞与受体卵母细胞的融合 | 第15-16页 |
·重建胚的激活 | 第16-18页 |
·核移植重建胚的培养 | 第18页 |
3.影响核移植效率的因素 | 第18-20页 |
·受体卵母细胞质 | 第18-19页 |
·供核细胞的来源和所处的细胞周期 | 第19页 |
·受体卵母细胞的去核 | 第19-20页 |
4.体细胞核移植技术的应用前景 | 第20页 |
·扩大优良种畜或稀有动物的数量 | 第20页 |
·生产转基因动物 | 第20页 |
·生产胚胎干细胞用于细胞和组织的代替疗法 | 第20页 |
·肿瘤和癌细胞基因活动规律的研究 | 第20页 |
5.细胞核移植技术存在的问题 | 第20-21页 |
·核移植的总效率很低 | 第20页 |
·后代存活率低 | 第20-21页 |
·线粒体DNA(mDNA)问题 | 第21页 |
6.本实验研究的目的和意义 | 第21-22页 |
实验部分 | 第22-41页 |
第一部分:材料与用具 | 第23-27页 |
1.主要仪器、器具及主要试剂 | 第23-25页 |
·主要仪器、器具 | 第23页 |
·主要试剂 | 第23-24页 |
·主要器具的制备 | 第24-25页 |
·固定管的制备 | 第24-25页 |
·去核针的制备 | 第25页 |
·注核针的制备 | 第25页 |
2.本试验涉及的培养液 | 第25-27页 |
·猪胚胎体外培养液NCSU-23 | 第25页 |
·猪卵母细胞体外成熟基础培养基(改良TCM199) | 第25-26页 |
·洗卵液及抽卵液 | 第26页 |
·洗卵液 | 第26页 |
·抽卵液 | 第26页 |
·融合液 | 第26页 |
·显微操作液 | 第26页 |
·发情牛(猪)血清的制备 | 第26-27页 |
·猪卵泡液的制备 | 第27页 |
第二部分:实验方法与实验设计 | 第27-30页 |
1.试验方法 | 第27-29页 |
·猪卵母细胞的收集及体外成熟(IVM) | 第27页 |
·猪卵丘细胞的分离与培养 | 第27-28页 |
·去核、移核操作 | 第28页 |
·盲吸法 | 第28页 |
·活性荧光染色去核法 | 第28页 |
·盲吸法和活性荧光染色法联合去核法 | 第28页 |
·供核体细胞与受体卵母细胞的融合 | 第28-29页 |
·核移植后的重建胚激活 | 第29页 |
·核移胚的培养和体外发育 | 第29页 |
2. 实验设计 | 第29-30页 |
·不同级别猪卵母细胞对体外成熟的影晌 | 第29页 |
·不同培养基添加物对猪卵母细胞体外成熟影晌 | 第29页 |
·培养的卯丘细胞和直接分离的卵丘细胞对猪体细胞核移植的影响 | 第29页 |
·不同去核方法对猪卵母细胞的去核效果 | 第29页 |
·不同移核方式对猪体细胞核移植效果的影响 | 第29-30页 |
·核质作用时间对猪体细胞核移植效果的影响 | 第30页 |
第三部分:实验结果和分析 | 第30-34页 |
·不同级别猪卵母细胞对体外成熟的影响 | 第30页 |
·不同培养基添加物对猪卵母细胞体外成熟影响 | 第30-31页 |
·培养传代的卵丘细胞和直接分离的卵丘细胞对猪体细胞核移植的影响 | 第31页 |
·不同去核方法对猪卵母细胞的去核效果 | 第31-32页 |
·不同移核方式对猪体细胞核移植效果的影响 | 第32页 |
·核质作用时间对猪体细胞核移植效果的影响 | 第32-34页 |
第四部分:讨论 | 第34-40页 |
·不同级别猪卵母细胞体外成熟效果 | 第34页 |
·不同培养基添加物对猪卵母细胞体外成熟的影响 | 第34-35页 |
·培养的卵丘细胞和直接分离的卵丘细胞对猪体细胞核移植的影响 | 第35-36页 |
·不同去核方法对猪卵母细胞去核效果的影响 | 第36-38页 |
·不同移核方式对猪体细胞核移植效果的影响 | 第38页 |
·核质作用时间对猪体细胞核移植效果的影响 | 第38-40页 |
第五部分:结论 | 第40-41页 |
参考文献 | 第41-49页 |
附录 | 第49-54页 |
致谢 | 第54-55页 |
发表文章 | 第55页 |