| 中文摘要 | 第1-9页 |
| 英文摘要 | 第9-11页 |
| 第一章 嗜热脂肪芽胞杆菌精氨酰-tRNA 合成酶的性质研究 | 第11-46页 |
| 摘要 | 第11页 |
| 关键词 | 第11-12页 |
| 引言 | 第12-16页 |
| 实验部分 | 第16-36页 |
| 1. 材料与方法 | 第16-26页 |
| ·材料 | 第16-17页 |
| ·方法 | 第17-26页 |
| ·B.stearothermophilus 基因组的抽提和PCR 扩增目的基因 | 第17页 |
| ·含B.stearothermophilus ArgRS 基因质粒的构建 | 第17-18页 |
| ·B.stearothermophilus ArgRS 基因的表达 | 第18页 |
| ·B.stearothermophilus ArgRS 的纯化 | 第18-19页 |
| ·聚丙烯酰胺凝胶电泳 | 第19页 |
| ·蛋白质浓度的测定 | 第19页 |
| ·园二色性(CD)光谱的测定 | 第19-20页 |
| ·含 B.stearothermophilus tRNAArg(ACG) 基因表达质粒的构建 | 第20-22页 |
| ·B.stearothermophilus tRNAArg(ACG) 基因的表达 | 第22-23页 |
| ·总tRNA 的抽提 | 第23页 |
| ·B.stearothermophilus tRNAArg(ACG) 的纯化 | 第23-24页 |
| ·B.stearothermophilus ArgRS 精氨酰化反应的最适镁离子浓度和pH 值的测定 | 第24页 |
| ·B.stearothermophilus ArgRS 精氨酰化反应最适温度的测定 | 第24页 |
| ·B.stearothermophilus ArgRS 热稳定性实验 | 第24-25页 |
| ·B.stearothermophilus ArgRS 动力学常数的测定 | 第25-26页 |
| 2. 实验结果 | 第26-36页 |
| ·质粒pET28a(+)-argS’的构建 | 第26-27页 |
| ·B.stearothermophilus ArgRS 的纯化 | 第27-28页 |
| ·B.stearothermophilus ArgRS 的二级结构分析 | 第28页 |
| ·B.stearothermophilus tRNAArg(ACG)基因表达质粒的构建和tRNAArg(ACG) 的纯化 | 第28-29页 |
| ·B.stearothermophilus ArgRS 精氨酰化反应的最适镁离子浓度和pH 值 | 第29-31页 |
| ·B.stearothermophilus ArgRS 精氨酰化反应活力与温度的关系 | 第31-32页 |
| ·B.stearothermophilus ArgRS 催化动力学常数的测定 | 第32-36页 |
| 讨论 | 第36-41页 |
| 参考文献 | 第41-46页 |
| 第二章 嗜热脂肪芽胞杆菌精氨酰-tRNA 合成酶的特征序列 KMSK 与其它氨基酸残基的作用 | 第46-71页 |
| 摘要 | 第46-47页 |
| 关键词 | 第47页 |
| 引言 | 第47-51页 |
| 实验部分 | 第51-62页 |
| 1. 材料与方法 | 第51-57页 |
| ·材料 | 第51-52页 |
| ·方法 | 第52-57页 |
| ·表达B. stearothermophilus ArgRS 突变酶基因的质粒构建所用的引物 | 第52-53页 |
| ·含B.stearothermophilus ArgRS 突变酶基因质粒的构建 | 第53-54页 |
| ·含E.coli Hi56-ArgRS 及其突变酶基因质粒的构建 | 第54-56页 |
| ·B.stearothermophilus 和E. coli ArgRS 突变酶基因的表达以及突变酶的纯化 | 第56页 |
| ·蛋白质浓度的测定 | 第56页 |
| ·ArgRS 的精氨酸活化反应活力的测定 | 第56-57页 |
| 2. 实验结果 | 第57-62页 |
| ·B.stearothermophilus ArgRS 突变酶基因的表达和酶的纯化 | 第57-58页 |
| ·E.c oli ArgRS 突变酶基因的表达和酶的纯化 | 第58-59页 |
| ·B.stearothermophilus ArgRS 突变酶精氨酸活化活力的测定 | 第59-61页 |
| ·E.coli ArgRS 突变酶精氨酸活化活力的测定 | 第61-62页 |
| 讨论 | 第62-66页 |
| 参考文献 | 第66-71页 |
| 第三章 精氨酰-tRNA 合成酶对tRNAArg(ACG)的识别的种属特异性研究 | 第71-97页 |
| 摘要 | 第71页 |
| 关键词 | 第71-72页 |
| 引言 | 第72-75页 |
| 实验部分 | 第75-89页 |
| 1. 材料与方法 | 第75-83页 |
| ·材料 | 第75-76页 |
| ·方法 | 第76-83页 |
| ·T.thermophilus ArgRS 基因的克隆、表达和酶的纯化 | 第76-77页 |
| ·T.thermophilus tRNAArg(ACG) 基因的克隆,表达和tRNAArg(ACG) 的纯化 | 第77页 |
| ·含B.stearothermophilus tRNAArg(ACG) 基因的体外表达重组质粒的构建 | 第77-79页 |
| ·含E.coli tRNAArg(ACG) 突变基因体外表达重组质粒的构建 | 第79-81页 |
| ·体外转录模板DNA 的制备和体外转录 | 第81-83页 |
| ·ArgRS 精氨酰化反应活力的测定 | 第83页 |
| 2. 实验结果 | 第83-89页 |
| ·T.thermophilus ArgRS 和其tRNAArg(ACG) 的纯化 | 第83-85页 |
| ·ArgRS 精氨酰化体内表达的tRNAArg(ACG) 的速度常数比较 | 第85-86页 |
| ·ArgRS 精氨酰化体外转录的tRNAArg (in vitro) 和体内表达的tRNAArg (in vivo) 的速度常数比较 | 第86-87页 |
| ·B.stearothermophilus ArgRS 对E. coli tRNAArg(ACG) 突变体的识别 | 第87-89页 |
| 讨论 | 第89-92页 |
| 参考文献 | 第92-97页 |
| 结论 | 第97-99页 |
| 附录:本论文缩写汇编 | 第99-102页 |
| 在学期间论文发表和获奖目录 | 第102-103页 |
| 致谢 | 第103页 |
