| 1 前言 | 第1-23页 |
| ·ZP3与避孕疫苗 | 第9-14页 |
| ·用来发展避孕疫苗的ZP3抗原表位的研究进展 | 第9-12页 |
| ·两个与本研究相关的ZP3 B细胞表位 | 第12-14页 |
| ·昆虫杆状病毒表达载体系统 | 第14-19页 |
| ·昆虫杆状病毒概述 | 第14-15页 |
| ·重组杆状病毒的构建和筛选 | 第15-16页 |
| ·昆虫杆状病毒载体表达系统的特点 | 第16-19页 |
| ·研究背景及其目的意义 | 第19-22页 |
| ·hCP基因DNA的设计 | 第19页 |
| ·hCP基因杆状病毒表达载体的构建和重组病毒的制备 | 第19-21页 |
| ·rhZP3重组酵母的构建及其表达鉴定 | 第21页 |
| ·本研究的目的和意义 | 第21-22页 |
| ·本研究的技术路线 | 第22-23页 |
| 2 实验材料和试剂 | 第23-25页 |
| ·主要仪器和设备 | 第23-24页 |
| ·材料 | 第24页 |
| ·试剂 | 第24-25页 |
| ·细胞培养试剂 | 第24页 |
| ·分子生物学试剂 | 第24页 |
| ·酵母培养试剂 | 第24页 |
| ·电泳试剂 | 第24-25页 |
| ·免疫学试剂材料 | 第25页 |
| 3 实验方法 | 第25-35页 |
| ·hCP在昆虫细胞表达系统中的表达 | 第25-29页 |
| ·Hi5昆虫细胞的培养和感染 | 第25-27页 |
| ·RT-PCR鉴定hCP在昆虫细胞中的表达 | 第27-28页 |
| ·Tricine-SDS-PAGE分析重组病毒感染昆虫细胞后的培养上清 | 第28-29页 |
| ·昆虫细胞优化表达 | 第29页 |
| ·rhZP3抗血清的制备 | 第29-32页 |
| ·免疫抗原的准备 | 第30页 |
| ·免疫动物制备抗血清 | 第30-31页 |
| ·ELISA检测抗血清效价 | 第31页 |
| ·ELISA检测针对rhZP3的特异性抗体的效价 | 第31-32页 |
| ·单价特异性抗血清的制备 | 第32页 |
| ·人正常卵巢组织石蜡切片制备 | 第32页 |
| ·免疫组化鉴定抗血清的特异性 | 第32-33页 |
| ·重组病毒感染Hi5细胞分泌蛋白的Western blot检测 | 第33页 |
| ·间接竞争性ELISA分析hCP与抗rhZP3抗体的结合力 | 第33-34页 |
| ·hCP结合精子能力研究 | 第34-35页 |
| ·人正常精子的制备 | 第34页 |
| ·样品与精子共孵育 | 第34页 |
| ·精子涂片 | 第34-35页 |
| ·精子的免疫细胞化学技术检测hCP结合精子的能力 | 第35页 |
| 4 结果 | 第35-45页 |
| ·hCP在昆虫细胞中的表达结果 | 第35-38页 |
| ·昆虫细胞感染前后的光镜观察 | 第35-36页 |
| ·重组杆状病毒感染的昆虫细胞的RT-PCR结果 | 第36-37页 |
| ·Tricine-SDS-PAGE实验结果 | 第37-38页 |
| ·rhZP3抗血清制备的结果 | 第38-40页 |
| ·甲醇诱导酵母工程菌的表达产物SDS-PAGE分析 | 第38-39页 |
| ·ELISA检测制备抗血清的效价以及中和处理后的针对rhZP3的特异性抗体的效价 | 第39-40页 |
| ·rhZP3抗血清特异性的免疫组化检测结果 | 第40-41页 |
| ·人卵泡组织切片ZP观察 | 第40页 |
| ·rhZP3特异性抗血清与人卵巢透明带的反应 | 第40-41页 |
| ·hCP生物活性研究结果 | 第41-44页 |
| ·Western blot结果 | 第41-42页 |
| ·间接竞争ELISA结果 | 第42-44页 |
| ·精子免疫细胞化学染色结果 | 第44-45页 |
| 5 讨论和小结 | 第45-58页 |
| ·重组人ZP3嵌合肽在昆虫细胞-杆状病毒表达系统中的有效表达 | 第45-50页 |
| ·杆状病毒表达系统的选择 | 第45-47页 |
| ·昆虫细胞系的选择 | 第47-48页 |
| ·从转录和翻译水平上对hCP在昆虫细胞中的表达鉴定 | 第48-49页 |
| ·hCP基因在昆虫细胞中的优化表达 | 第49-50页 |
| ·特异性抗rhZP3抗血清的制备 | 第50-52页 |
| ·免疫动物制备血清的影响因素及其方法选择 | 第50-51页 |
| ·单价特异性抗体的制备 | 第51-52页 |
| ·探讨影响特异性抗体效价的因素和对策 | 第52页 |
| ·免疫组化检测抗rhZP3特异性的分析 | 第52-54页 |
| ·hCP的抗原性的初步探讨 | 第54-55页 |
| ·研究hCP抗原性的意义 | 第54页 |
| ·Western blot的结果分析 | 第54-55页 |
| ·间接竞争ELISA的结果分析 | 第55页 |
| ·hCP结合精子能力的初探 | 第55-56页 |
| ·小结 | 第56-58页 |
| 参考文献 | 第58-65页 |
| 附录 | 第65-74页 |
| 附录Ⅰ hCP序列图谱 | 第65页 |
| 附录Ⅱ 各种试剂配方 | 第65-71页 |
| 附录Ⅲ 常规石蜡包埋组织和H-E染色实验方法 | 第71-73页 |
| 附录Ⅳ 蛋白浓度测定方法 | 第73-74页 |
| 论文发表情况 | 第74-75页 |
| 致谢 | 第75页 |
