| 第一章 前言 | 第1-11页 |
| ·克雷伯氏菌 | 第8-9页 |
| ·大肠杆菌表达系统 | 第9-10页 |
| ·技术路线 | 第10-11页 |
| 第二章 材料与方法 | 第11-24页 |
| ·实验材料 | 第11-16页 |
| ·菌株与质粒 | 第11页 |
| ·酶与试剂 | 第11页 |
| ·主要仪器设备 | 第11-12页 |
| ·常用缓冲液配方 | 第12-16页 |
| ·方法与步骤 | 第16-24页 |
| ·Klebsiella pneumoniae的复苏培养 | 第16页 |
| ·菌种的保存 | 第16页 |
| ·Klebsiella pneumoniae基因组总DNA的制备 | 第16页 |
| ·甘油脱水酶基因(dhaB)和1，3-丙二醇氧化还原酶基因(dhaT)的引物设计和PCR扩增 | 第16-18页 |
| ·大肠杆菌感受态的制备 | 第18-19页 |
| ·质粒DNA的大量制备 | 第19页 |
| ·少量提取质粒 | 第19-20页 |
| ·DNA的酶切与连接 | 第20页 |
| ·连接产物对大肠杆菌感受态细胞的转化 | 第20页 |
| ·阳性克隆的筛选和酶切验证 | 第20页 |
| ·重组子的质粒PCR验证 | 第20-21页 |
| ·含RBS序列的dhaT基因扩增 | 第21-22页 |
| ·菌液PCR | 第22页 |
| ·重组菌株的诱导表达 | 第22页 |
| ·大肠杆菌细胞的破碎 | 第22页 |
| ·甘油脱水酶活力的测定 | 第22-23页 |
| ·外源基因在大肠杆菌中的表达检测 | 第23页 |
| ·蛋白质的SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳 | 第23页 |
| ·重组大肠杆菌利用甘油的摇瓶发酵实验 | 第23-24页 |
| 第三章 结果和分析 | 第24-46页 |
| ·甘油脱水酶基因(DHAB基因)表达质粒的构建 | 第24-32页 |
| ·dhaB基因的克隆 | 第25页 |
| ·pGEM-3zf+重组克隆质粒的验证 | 第25-27页 |
| ·甘油脱水酶基因(dhaB)基因的序列分析 | 第27-28页 |
| ·甘油脱水酶基因(dhaB)与pSE380载体的连接 | 第28-30页 |
| ·甘油脱水酶活性的测定及SDS-PAGE检测 | 第30-32页 |
| ·1,3-丙二醇氧化还原酶基因(DHAT)表达质粒的构建 | 第32-38页 |
| ·dhaT基因的克隆 | 第33-34页 |
| ·pGEM-13zf+重组克隆质粒的验证 | 第34-35页 |
| ·dhaT基因的序列分析 | 第35-36页 |
| ·1，3-丙二醇氧化还原酶基因(dhaT)与pSE380载体的连接 | 第36-37页 |
| ·表达产物的SDS-PAGE分析 | 第37-38页 |
| ·多顺反子表达质粒的构建 | 第38-43页 |
| ·多顺反子表达质粒的构建 | 第38-40页 |
| ·含RBS序列的dhaT基因扩增 | 第40页 |
| ·多顺反子表达质粒的构建 | 第40-41页 |
| ·PCR确定目的片段的插入方向 | 第41-42页 |
| ·表达产物的SDS-PAGE分析 | 第42-43页 |
| ·重组菌株甘油发酵实验 | 第43-46页 |
| 第四章 讨论 | 第46-50页 |
| ·甘油脱水酶基因的扩增 | 第46页 |
| ·SD序列与ATG之间的距离 | 第46页 |
| ·DNA的体外重组 | 第46-47页 |
| ·外源基因在大肠杆菌中的表达 | 第47-48页 |
| ·问题与展望 | 第48-50页 |
| 第五章 结论 | 第50-51页 |
| 参考文献 | 第51-54页 |
| 致谢 | 第54页 |
